Meios em Bioquimica

Meios de cultura é um material nutriente que é preparado para o crescimento de microrganismos, onde, algumas bactérias podem crescer bem em qualquer meio de cultura, outras precisam de meios especiais para seu crescimento e outras, ainda, não podem crescer em qualquer meio não vivo desenvolvido. Quando o microrganismo é introduzido no meio de cultura para crescimento, é chamado de inóculo. E os microrganismos que crescem e se multiplicam dentro ou sobre o meio de cultura são denominados como cultura.

Na preparação dos meios e na manutenção das culturas de microrganismos é importante observar as necessárias condições de assepsia, de modo a se evitarem contaminações com outros microrganismos. Para se cultivar um microrganismo é fundamental se atentar as técnicas para o meio de cultura, uma vez que ele deve conter: meios nutrientes adequados para o microrganismo específico; quantidade de água adequada; um pH apropriado e um nível de conveniente de oxigênio ou até mesmo nenhum, dependendo do microrganismo a ser cultivado. E o mais importante: o meio deve ser estéril, sendo incubado na temperatura adequada.

Os meios de cultura dividem-se primeiramente em meios sólidos, aqueles que contêm ágar, e meios líquidos, sem ágar. Ambos os meios são preparados com água destilada, aquecidos até que se dissolvam completamente e posteriormente esterilizados por autoclavagem a 121ºC.

Quando se deseja o crescimento das bactérias em meio sólido, é acrescentado ao meio um agente solidificante conhecido como ágar que é um polissacarídeo complexo derivado de uma alga marinha. E poucos microrganismos podem degradar o ágar, o que permite que ele continue na fase sólida. Para utilização no laboratório o ágar é mantido em banho-maria a 50º C, temperatura esta que não destrói a maioria das bactérias quando adicionado sobre elas.

Os meios com ágar são contidos em tubos de ensaio ou em Placas de Petri. Tubos de ensaio são chamados de inclinados quando a solidificação é feita com o tubo inclinado em um ângulo onde grande área da superfície esteja disponível para o crescimento. E quando o ágar é mantido na vertical, chama-se de profundo. As Placas de Petri são placas rasas com uma tampa que a recobre até o fundo para evitar contaminações e, quando preenchidas, denominam-se culturas sólidas em Placas de Petri.

2. Objetivo

Preparo de meios de cultura para serem utilizados durante o cultivo de microrganismo, tratando-se de se familiarizar com os procedimentos de preparo e esterilização de meios de cultura e aplicação de seus diferentes tipos de meio, observando o crescimento bacteriano.

3. Materiais

• Água deionizada

• Espátula

• Tubos de vidro

• Algodão

• Pote de plástico para colocar os tubos

• Pipeta de 5 mL

• Bastão de vidro

• Sangue de carneiro desfibrinado

• Placas de Petri descartáveis

• Seringa de 10 mL

• Fita adesiva branca

• Fita para autoclave

• Autoclave

• Microondas

• Bico de Bunsen

• Colher

• Geladeira

• Pêra

• Béquer

• Erlenmeyer

• Papel alumínio

• Papel manilha

• Balança

• Proveta

• Meios de cultura (Ágar e BHI)

• Agulha

• Descartadores

• Estante

• Tesoura

• Luva térmica

• Copos descartáveis

• Álcool 70%

4. Meios de Cultura:

Bancada 3 – 100 mL de caldo BHI distribuindo 04 mL por tubo

200 mL de Ágar Sangue ± 20 mL por tubo

5. Procedimento

5.1 – Ágar Sangue

Em primeiro instante mediu-se 38 g de KASVI (Mueller Hinton II Agar) para 1 litro de água, obtendo 7,6g de ágar sangue. Posteriormente, tarou-se o peso do recipiente plástico (copo) para anular seu peso de forma que não interferisse na pesagem da solução. Para que a solução obtesse total homogeneização, foi necessário leva-la ao microondas. Após esse processo utilizou-se a proveta para medir o nível de água destilada que dissolveria o ágar sangue.

Após a homogeneização do ágar sangue através da fervura ocasionada pelo microondas, vedou-se à boca do Erlenmeyer com papel alumínio, fita adesiva e rotulada com o nome da banca, para, assim, estar apto para ir à autoclave, onde permaneceu por 15 minutos até alcançar a temperatura de 121° C. Retirou-se o conteúdo da autoclave depois do tempo correto com a ajuda de papel manilha e foi levado para a pia, onde, para que esfriasse até a uma temperatura de 50º C, teve auxilio da água corrente em movimentos circulares na parte externa do Erlenmeyer.

Tanto as esterilizações dos materiais que serão utilizados após a autoclavação do ágar sangue quanto à abertura da embalagem das Placas de Petri devem ser feitas frente ao Bico de Bulsen, para eliminar os microrganismos presentes ao seu redor. Desta forma, esterilizou-se com algodão e álcool 70% o recipiente