Analise Qualitativa de Aminoacidos
Por: Leandramoreira • 13/10/2015 • Trabalho acadêmico • 789 Palavras (4 Páginas) • 670 Visualizações
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Análise Qualitativa
de Aminoácidos
Bioquímica – Prática 2
Alunos:
- Mirella Trindade
- Maria Eugênia
- Nathalia Pereira
- Paulo Henrique Barbosa
Professor:
- Marco André Alves de Souza
Matéria:
- Bioquímica Geral I
Turma:
- P07
- Introdução
O grupo amino dos aminoácidos é facilmente removido por oxidação. A Ninhidrina é muito oxidante e, ao retirar o grupo amino, produz CO2, NH3 e um aldeído com um carbono a menos que o aminoácido inicial. A ninhidrina reduzida reage com NH3 liberado e outra molécula de ninhidrina, formando um complexo de cor violeta.
Outras aminas também reagem com a ninhidrina dando uma coloração em tom de azul, mas sem a liberação de CO2.
Alguns aminoácidos, ao reagir com a ninhidrina apresentam coloração amarela invés de violeta e, nesse caso, não há liberação de NH3, porém há grande produção de CO2.
O papel é composto por moléculas de celulose que possuem uma forte afinidade pela água presente no solvente, mas pouca afinidade pela fase orgânica, atuando como fase estacionária aquosa. À medida que o solvente contendo o soluto flui através do papel por capilaridade, parte do composto ocorre entre a fase móvel orgânica e a fase estacionária aquosa. Desta forma, parte do soluto deixa o papel e entra na fase móvel.
Quando a fase móvel alcança uma área do papel que não contém soluto, o mesmo fenômeno ocorre de novo, só que agora o soluto é transferido da fase móvel para a fase estacionária. Com o fluxo contínuo de solvente, possibilita-se a transferência do soluto do seu ponto de aplicação no papel para outro ponto localizado a certa distância no mesmo sentindo do fluxo do solvente.
Como os aminoácidos possuem diferentes cadeias laterais apresentam, portanto, diferentes taxas de migração. A detecção se dá através de reagentes capazes de revelar os aminoácidos em geral (como a ninhidrina) ou específicos para determinados aminoácidos.
- Objetivo
Identificar a presença de aminoácidos nas amostras e, através de cromatografia por papel, identificá-los.
- Materiais, Soluções e Solventes
- Tubos de ensaio
- Pipetas graduadas de 1mL
- Triptofano 0,1M
- Alanina 0,1M
- Leucina 0,1M
- Aspartame 4%
- Água
- Solução de Caseína
- Tela de Amianto
- Tubos Capilares
- Papel para cromatografia
- Tripé
- Bico de Bunsen
- Pera de sucção
- Ninhidrina 0,25%
- Procedimentos
Identificou-se os tubos de ensaio de acordo com a solução colocada em cada um, começando com o tubo número 1, contendo apenas água, até o 6, de acordo com a tabela abaixo:
Tubo | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
Solução | Água Destilada | Triptofano 0,1M | Alanina 0,1M | Leucina 0,1M | Aspartame 4% | Solução Proteica |
Quantidade (mL) | 1mL | 1mL | 1mL | 1mL | 1mL | 1mL |
Após pipetar-se as quantidades descritas acima para seus respectivos tubos de ensaio, levou-se então a grade de tubos para a capela onde, com o auxílio de um conta-gotas, adicionou-se 3 gotas de ninhidrina 0,25% em cada tubo. Posteriormente, levou-se os tubos para o banho-maria, por onde permaneceram durante 3 minutos, até que houve a mudança de coloração das soluções que inicialmente não apresentavam cor.
- Resultados
Após o banho-maria, observou-se o segundo quadro de coloração das soluções:
Tubo | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
Cor | Incolor | Azul | Azul | Azul | Azul | Amarelo |
O tubo 1, que inicialmente era incolor, permaneceu incolor, ou seja, como só foi adicionado água e ninhidrina no tubo, não havia aminoácido para reagir com a ninhidrina e formar o complexo de coloração azul característico do resultado positivo de aminoácidos em amostras.
Os tubos 2, 3 e 4, por sua vez, apresentaram a coloração de resultado positivo, ou seja, azul, caracterizando a presença de aminoácidos nas amostras.
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