Bioquimica. Preparar uma solução padrão

Índice

1 Introdução 1

2 Objectivos 2

3 Material e métodos 2

4 Resultados e cálculos 3

4.1 Gráfico 5

5 Discussão e conclusões 6

6 Referências Bibliográficas 7

1 Introdução

Nós vemos objectos como coloridos porque eles transmitem ou reflectem a porção da luz apenas numa dada região. Quando a luz policromática (luz branca), que contém todo o espectro de comprimento de onda na região visível ou ultravioleta, passa por um objecto, ele irá absorver certamente de um comprimento de onda, deixando o comprimento inabsorvido ser transmitido. Os resíduos de comprimento de onda transmitidos irão ser vistos como cor que é complementar a de absorvida (Christian, 2002).

Por esta razão o composto para ser analisado por espectrofotometria, deve absorver a luz, e dado que muitos compostos absorvem em radiação ultravioleta a análise é usualmente restrita a este espectro. Como é o caso das proteínas que são normalmente testadas nessa região, isso deve-se por terem a absorvância máxima nos 280 nm (Harris, 2003).

A colorimétria é um método que consiste na comparação, em condições bem-definidas, da cor produzida por uma substância que está em concentração desconhecida em uma amostra com a mesma cor produzida por uma quantidade conhecida do mesmo material (Barnes; Denney; Medham e Thomas, 2004).

A variação da cor de um sistema com a mudança de concentração de um componente é a base da análise colorimétrica. A cor é usualmente, devida à formação de um composto colorido pela adição de um reagente apropriado ou é inerente ao constituinte que se deseja analisar. A intensidade da cor é comparada com a intensidade da cor que se obtém com o mesmo procedimento pelo tratamento de uma amostra cuja quantidade e concentração são conhecidas (Barnes;et all, 2004).

A colorimetria visa a determinar a concentração de uma substância pela medida da absorvância relativa de luz, tomando como referência a absorção da substância numa concentração conhecida (Bassett; Denney; Jeffery e Mandham, 1992).

2 Objectivos

 Preparar uma solução padrão;

 Determinar a concentração desconhecida de uma solução protéica.

3 Material e métodos

1. Preparou-se o material necessário para a aula no 5 e levou-se para a mesa de trabalho;

2. Com o auxílio de uma caneta de filtro enumerou-se em 9 tubos de ensaio e pôs-se em ordem numérica no suporte;

3. Marcou-se 3 copos Becker de 10 ml e em 1 de 50 ml de capacidade, em função da solução que ia conter cada um, nomeadamente: solução de Albumina, água destilada, solução de Biureto e solução protéica desconhecida;

4. Usando pipetas diferentes, pipetou-se para os respectivos tubos de ensaios volumes de soluções de acordo com a tabela 1:

Tabela 1: Volumes da experiência

No do tubo 1 2 3 4 5 6 7 8

Solução de albumina - 0,4 0,8 1,2 1,6 2.0 - -

Água destilada 2.0 1,6 1,2 0,8 0,4 - - -

Solução de Biureto 8.0 8.0 8.0 8.0 8.0 8.0 8.0 8.0

Solução protéica desconhecida - - - - - - 2.0 2.0

Fonte: Guião de aula prática 5

5. Levou-se as preparações para banho-maria a 80oC e aqueceu-se durante 5 minutos, após retirados os tubos, deixou-se as soluções arrefecerem até a temperatura ambiente;

6. Em seguida agitou-se cuidadosamente os tubos de ensaio para homogeinizar as soluções;

7. Levou-se as soluções para as respectivas medições das absorvâncias no espectrofotómetro;

8. Pôs-se uma pequena quantidade da solução do tubo 1 no cuvete;

9. Em seguida pôs-se no espectrofotómetro e calibrou-se o aparelho em 570 nm, tendo este servido como teste branco (solução de biureto e água destilada).

10. E usando cuvetes diferentes, procedeu-se com as medições das absorvâncias dos restantes tubos e registou-se os valores;

11. Apôs efectuar-se os cálculos de concentrações nos tubos 2–6, produziu-se o gráfico de relação entre a concentração (abcissa) e a absorvância (A570 ordenada) que serviu como padrão;

12. Com o auxílio da curva padrão identificou-se a concentração de solução protéica desconhecida usando-se a sua absorvância.

4 Resultados e cálculos

No âmbito das medições, o teste branco registou valor zero (tubo 1) enquanto que nos tubos 2–6 registou-se valores das absorvâncias crescentes excepto nos tubos 7 e 8 em que as suas absorvâncias eram baixas.

As concentrações nos tubos 2–6 registaram valores crescentes constantes assim como as absorvâcias.

O gráfico produzido da curva padrão apresentou-se linear.

Cálculos de concentrações de Albumina nos tubos

Solução de Albumina: 10 mg/ml = 0.01 gr/100ml = 0.1 gr/L.

Formulas

Onde: C1 é concentração inicial de Albumina, V1 é volume inicial do Albumina, V2 volume final do Albumina e C2 é a concentração final do Albumina.

Tubo 2 dados

C1 = 0.1 g/l

V1 = 4x10-4 l

V2 = 1x10-2 l C2 =?

Tubo 3 dados