O DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E BIOFÍSICA

UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA[pic 1]

INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E BIOFÍSICA

DISCIPLINA: BIOQUÍMICA APLICADA À NUTRIÇÃO I (ICS067)

PROF.: ALINE MIRANDA MASCARENHAS/RAVENA NASCIMENTO

CARACTERIZAÇÃO DE ENZIMAS

1. INTRODUÇÃO:

        Enzimas são, em maioria, proteínas com atividade catalítica. Elas aceleram reações termodinamicamente favorecidas. Os compostos transformáveis pela ação das enzimas recebem o nome de substrato. As enzimas são específicas em relação à reação que catalisam e exibem também um alto grau de especificidade em relação ao substrato. A velocidade de uma reação enzimática é função de diversos fatores, como: concentração de enzima, concentração de substrato, temperatura, pH, força iônica, etc.

2. OBJETIVO:

Observar a atividade da enzima catalase em diferentes condições: pH, temperatura e variação da concentração do substrato.

3. MATERIAL E MÉTODOS:

• Água de alface (200 mL de água destilada + folhas de alface trituradas no liquidificador)
• H2O2 4% líquida (Pode ser obtido na Farmácia. Abaixo, algumas opções disponíveis) 

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• Solução de albumina (Quebra-se 1 ovo, separa a gema da clara. À clara adiciona-se 100ml de água, e mistura até obter uma solução)
• Sumo de 1 limão
• Solução de bicarbonato (30ml de água e 1 colher de sopa de bicarbonato)
• 50ml de leite
• Água
• Banho-maria
• Copos de vidro transparentes (Os menores possíveis), colher de sopa e de sobremesa

3.1. EFEITO DA TEMPERATURA:

1. Fazer uma primeira bateria de 3 copos pequenos transparentes, cada um contendo duas medidas de ¼ de colher de chá de água de alface (± 3ml). Distribuir os copos da seguinte maneira: COPO 1 no congelador (0°C), COPO 2 à temperatura ambiente e COPO 3 à 100°C (Banho-maria).
2. Preparar outra bateria com mais 3 copos pequenos transparentes, enumerar e proceder como descrito a seguir:

1. COPO NO 1: adicionar 1 colher de sobremesa de água oxigenada; 1 colher de sopa de água; 6 gotas da solução de albumina e homogeneizar. Incubar a 0oC (Congelador) por 10 minutos. Depois de passados os 10 minutos, adicionar, cuidadosamente, a medida de água de alface (± 3ml) a 0°C (O copo com água de alface da primeira bateria que estava no congelador). Homogeneizar com uma colher vagarosamente, esperar 10 minutos, medir a coluna de espuma com o auxílio de uma régua e anotar o resultado na tabela.
2. COPO No 2: adicionar 1 colher de sobremesa de água oxigenada; 1 colher de sopa de água; 6 gotas da solução de albumina e homogeneizar. Incubar a temperatura ambiente por 10 minutos. Depois de passados os 10 minutos, adicionar, cuidadosamente, a medida de água de alface (± 3ml) (O copo com água de alface da primeira bateria que estava à temperatura ambiente). Homogeneizar com uma colher vagarosamente, esperar 10 minutos, medir a coluna de espuma com o auxílio de uma régua e anotar o resultado na tabela.
3. COPO No 3: adicionar 1 colher de sobremesa de água oxigenada; 1 colher de sopa de água; 6 gotas da solução de albumina e homogeneizar. Incubar a 100oC (Banho-maria) por 10 minutos. Depois de passados os 10 minutos, adicionar, cuidadosamente, a medida de água de alface (± 3ml) a 100°C (O copo com água de alface da primeira bateria que estava no banho-maria). Homogeneizar com uma colher vagarosamente, esperar 10 minutos, medir a coluna de espuma com o auxílio de uma régua e anotar o resultado na tabela.

1. Construir um gráfico, analisando os resultados.

Copo	Água oxigenada (ml)	Água (mL)	Solução albumina (gotas)	Temperatura (oC)	Água de alface (ml)	Resultado (mm de espuma)
1	±1,0*	2,0-3,0**	6	0	3,0**
2	±1,0*	2,0-3,0**	6	±30	3,0**
3	±1,0*	2,0-3,0**	6	100	3,0**

*1/4 col. chá, ** 2x ¼ col. de chá

3.2. EFEITO DO pH

1. Preparar uma bateria de 4 copos transparentes pequenos (Os menores possíveis).
2. Distribuir os reagentes como indicado na tabela abaixo, respeitando a ordem dos mesmos (da esquerda para a direita). 
3. Esperar 10 minutos e anotar o resultado (mm de espuma formada a partir da superfície do líquido).
4. Construir o gráfico, analisando os resultados.

Copo	Água   (mL)	Sol. pH       (2 mL)**	Água alface (mL)	Sol. Albumina (Gotas)	H2O2 (mL)	Resultado (mm de espuma)
1	2,0**	-	3,0**	6	1,0*
2	-	Suco Limão	3,0**	6	1,0*
3	-	Leite	3,0**	6	1,0*
4	-	Sol. Bicarbonato	3,0**	6	1,0*

             *1/4 col. chá, ** 2x ¼ col. chá

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