Relatório da Aula Prática de Bioquímica I – Titulação de Aminoácidos

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Relatório da Aula Prática de Bioquímica I – Titulação de Aminoácidos

                                                                               

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1. Introdução

Apenas 20 aminoácidos são encontrados normalmente em proteínas. A estrutura geral dos aminoácidos inclui um grupo amina e um grupo carboxila, ambos ligados ao carbono α (aquele próximo ao grupo carboxila). O carbono α também é ligado a um hidrogênio e ao grupo de cadeia lateral, representado pela letra R.

Os grupos R são classificados de acordo com diversos critérios, dois dos quais são especialmente importantes. O primeiro deles é a natureza polar ou apolar da cadeia lateral. O segundo depende da presença de um grupo acídico ou básico na cadeia lateral.

A classificação dos aminoácidos quanto ao radical pode ser feita em: Aminoácidos apolares que apresentam radicais de hidrocarbonetos apolares ou hidrocarbonetos modificados, exceto a glicina, Aminoácidos polares neutros que apresentam radicais que tendem a formar pontes de hidrogênio, Aminoácidos ácidos que apresentam radicais com grupo carboxílico e Aminoácidos básicos que apresentam radicais com o grupo amino.

No início da curva observa-se que os grupos dos aminoácidos carboxilo e amino estão completamente protonados. Com a titulação o grupo carboxílico vai liberar prótons. Durante essa liberação é evidenciado um ponto onde a quantidade de aminoácidos protonados e desprotonados é igual (50% cada um), neste ponto o pK se iguala ao pH.

         O ponto onde se observa o fim da liberação de prótons por parte do carboxila é o ponto isoelétrico, pI, esse ponto possui um pH característico, onde a carga líquida é igual a zero.

Com a continuação da titulação, o próton do grupo NH3+será liberado. Também se observa um ponto de inflexão nessa segunda parte da curva de titulação.

Os aminoácidos ácidos possuem um segundo grupamento carboxila, na cadeia lateral, assim como os aminoácidos básicos possuem um segundo grupamento amino em sua cadeia lateral, então nestes casos se calcula também o pK.

1. Objetivo

  Construção e identificação da curva de titulação de três aminoácidos: um ácido, um básico e outro neutro (ácido aspártico, arginina e glicina, respectivamente).

1. Materiais e Metodologia

A turma foi dividida em três grupos, e cada um deles ficou responsável por titular uma das soluções de aminoácido. Abaixo a lista de materiais necessários:

• 1 becker
• 1 barra magnética de agitação
• placa de agitação
• pHmetro
• 1 pipeta de 1 mL
• ponteiras para pipeta de 1 mL
• 50 mL da solução de aminoácido 10 mM
• solução de hidróxido de sódio (NaOH) 0,25 M
• papel milimetrado (um por aluno)

Procedimento:

1. Colocar 50 mL da solução de aminoácidos no becker. Colocar a barra magnética dentro desta solução. Colocar o becker sobre a placa de agitação e comece a agitar a solução lentamente.

1. Calibrar o pHmetro e, em seguida, medir o pH da solução de aminoácidos. Anotar como valor inicial da titulação
2. Adicionar o volume da solução de NaOH 0,25 M indicado na tabela 1, e anotar os valores de pH encontrados após cada adição.

1. Ao final das 30 adições, construir um gráfico relacionando o volume de NaOH adicionado (eixo de x) ao pH medido (eixo de y).

1. Resultados e Discussão

Segue abaixo a tabela com os valores de pH encontrados  nas soluções:

Adição	Volume mL de	pH	pH	pH
NaOH (0,25 M)	(solução A - Arginina)	(solução B - Glicina)	(solução C - Ácido Aspártico)
0	-	2,1	2,7	2,5
1	0,4	2,3	2,7	2,4
2	0,4	1,2	2,7	2,7
3	0,4	2,7	2,8	2,7
4	0,2	2,9	2,8	3,2
5	0,2	7,1	2,4	2,7
6	0,2	8,1	2,3	2,7
7	0,2	8	2,7	2,5
8	0,2	8,3	2,7	2,4
9	0,2	8,9	2,9	2,7
10	0,2	9,2	2,7	2,1
11	0,2	9,2	2,9	2,8
12	0,2	9,2	2,6	2,7
13	0,2	9,5	3	3,1
14	0,2	10,7	3,3	3
15	0,2	10,7	3,9	2,8
16	0,2	11,1	5,6	3,2
17	0,2	11,5	7,7	3,1
18	0,2	11	7,8	3
19	0,2	11	8,6	3,1
20	0,2	11	8,3	3,2
21	0,2	11	9,2	3,8
22	0,2	11	8,8	4
23	0,4	11,1	9,1	4
24	0,4	11,1	9,6	4,8
25	0,4	11,3	9,8	4,8
26	0,4	10,8	9,1	5,2
27	0,4	11,2	9,6	6,8
28	0,4	12	9,9	8,1
29	0,4	11,4	10,1	8,2
30	0,4	11,2	10,5	8,8

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