Estudo Dirigido: Identificação de Enterobactérias

PROTOCOLO DE AULA PRÁTICA

Curso: Farmácia

Disciplina: Microbiologia Clínica

Professora: Luciane Gelatti

Aula: Identificação de Enterobactérias

Material necessário para cada grupo:

• Colônias bacterianas recentes.
• Bico de Bunsen;
• Alça bacteriológica;
• Álcool 70%;
• Lâminas de vidro;
• Corantes de GRAM;
• Tubos com meio TSI, Citrato, Lisina, Uréia, SIM;
• Reativo de Kovacs.

SÉRIE BIOQUÍMICA

1. TSI:

Objetivo: pesquisar a fermentação dos açucares. Observar a produção de disulfidrilase.

Composição: Glicose, sacarose, lactose e sulfato ferroso.

Resultado: *Em pH 7,4 o meio é vermelho (devido ao indicador de pH, vermelho de fenol). Se a bactéria fermentar açúcares haverá acidificação do meio, mudando a cor do indicador para amarelo.

**Presença de H2S: traduzida pela presença de manchas pretas no meio. Isso ocorre porque a bactéria produz a enzima sulfidrilase, que é capaz de degradar o sulfato ferroso, dando como produto H2S.

***Produção de CO2 ocorre durante a fermentação e se traduz pela presença de espaços vazios.

• Meio TSI (Triple Sugar Iron)[pic 1][pic 2]

• Ápice vermelho = lactose negativa
• Ápice amarelo = lactose positiva
• Fundo vermelho = glicose negativa
• Fundo amarelo = glicose positiva
• Rachaduras no meio = gás positivo
• Meio integro = gás negativo
• Coloração negra = H2S positivo
• Sem coloração negra = H2S negativa

2) LISINA

Objetivo: pesquisar a descarboxilação da lisina. Somente para bactérias que fermentam glicose, pois a reação de descarboxilação só ocorre em pH ácido.

Composição: Dextrose, lisina, sulfato ferroso amoniacal e tiossulfato de sódio. Indicador de pH: púrpura de bromocresol.

Resultado: O consumo inicial de glicose pelas bactérias gera ácido, que são observados pela modificação da base do meio para a cor amarela. Se a bactéria apresentar a enzima lisina descarboxilase, ocorre neutralização dos ácidos e o meio volta a ser púrpura.

.[pic 3][pic 4]

• Lisina (Lisina descarboxilase)

•    Lisina positiva = coloração violeta/púrpura
•    Lisina negativa = coloração amarela

3) URÉIA

Objetivo: pesquisar a produção de urease pela bactéria.

Composição: uréia e vermelho de fenol.

Resultado: A cor do meio é laranja claro em pH 6,8-7,2 e rosa pink em pH alcalino. Quando a reação é positiva, a bactéria é produtora de urease, que degrada a uréia do meio transformando-a em carbonato de amônia que alcaliniza o meio, virando a cor do indicador de pH. [pic 5][pic 6]

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