Farmacognosia

Em uma lâmina limpa, dentro da zona de segurança do bico de Bulsen, adicionamos uma gota de água destilada. Com a alça bacteriológica devidamente flambada ao rubro, coletamos o inóculo do meio de cultura e espalhamos o mesmo na lâmina junto à água destilada com o auxílio da alça, seguindo as recomendações de biossegurança necessárias e as instruções do professor. O professor orientou que o espalhamento da amostra deveria ser feito de modo que todo o conteúdo do inóculo estivesse uniforme na lâmina a ser analisada.

Para a fixação da bactéria à lâmina, pairamos a mesma contendo o inóculo sob o bico de Bulsen até que o líquido contido (bactéria + água destilada) secasse, de modo a matar as bactérias existentes no mesmo. Com o esfregaço preparado, adicionamos cristal violeta, corante principal, cobrindo todo o esfregaço durante um minuto.

Lavamos o esfregaço com água corrente para a retirada do excesso de cristal violeta da amostra. O suficiente até que não apresentou-se mais é a coloração roxa na água.

Posteriormente, adicionamos lugol, que possui a função de mordente, ou seja, aumenta a afinidade do corante pela célula, de modo a cobrimos todo o esfregaço durante um minuto. Em seguida, adicionamos o álcool absoluto, diferenciador, sua ação permite que algumas células de descorem mais facilmente que outras, a adição do álcool deve ser rápida e precisa, deve durar de 5 a 10 segundos.

Após, lavamos novamente a amostra com água corrente e adicionamos safranina, corante secundário, que irá corar as células anteriormente descoradas com o álcool etílico. A ação da safranina deve ser de 30 segundos. Por fim, lavamos com água novamente e colocamos para secar delicadamente a amostra de modo a retirar qualquer excesso de água. Colocamos algumas gotas de óleo de imersão e observamos a diferenciação das bactérias Gram-positivas e das Gram-negativas ao microscópio óptico, utilizando a lente objetiva de imersão.