Coloracao E Gram

Introdução: Proposta por C. Gram em 1884, esta técnica permite distinguir células bacterianas quanto à composição das suas paredes celulares, facilitando a observação morfológica das próprias células. Em termos físico-químicos, o processo baseia-se na reação de um corante alcalino com os ácidos da célula. Por adição de lugol (solução de iodo) forma-se um complexo que, quando se aplica o álcool, desaparece ou é retido, consoante a diferente sensibilidade das paredes celulares. Torna-se assim possível distinguir entre bactérias Gram positivas (Gram +) e Gram negativas (Gram -), consoante a cor final que as células tomam. Esta coloração é um dos critérios fundamentais usados em taxonomia bacteriana, pois esta diferença de comportamento é atribuída a diferenças na composição da parede celular.

Procedimento da coloração para todos os métodos:

• Cobriu-se o esfregaço com cristal violeta durante 1 minuto;

• Lavou-se com água corrente (somente um fio de água) evitando incidir o jato diretamente sobre o esfregaço;

• Cobriu-se com lugol durante 1 minuto;

• Repetiu-se a lavagem;

• Descorou-se com álcool/acetona(gotejou-se a solução até que não saia mais o corante);

• Repetiu-se a lavagem;

• Cobriu-se com fucsina durante 30 segundos;

• Repetiu-se a lavagem;

• Esperou-se a lâmina secar naturalmente ao ar livre.

Objetivo: Demonstrar a importância da coloração de Gram e estabelecer a distinção entre:

• Bactérias Gram-positivas e Gram-negativas;

• As morfologias cocos, bacilos;

• Arranjos bacterianos (estafilococos, estreptococos, etc.;

• Leveduras.

Materiais:

- Lâminas,placas de petri, vidro de relógio, cadinho, pistilo, pisseta, béquer, água destilada, óleo de imersao, frasco com álcool/areia, alça bacteriológica, microscópio óptico, bico de bunsen, balança analítica, capela, luvas.

- Solução de cristal violeta, lugol, álcool/acetona, fucsina.

- Activia(bifidobacterium animalis), caldo de cana, yakult, placa sem nome, placa do tanque de peixes.

Microscopia: Examinou-se a amostra ao microscópio. Colocou-se a lâmina com amostra corada ao microscópio e focalizou-se com a objetiva 10X, logo em seguida, mudou-se para a objetiva 20X e focalizou-se, após, mudou-se para a objetiva 50X e focalizou-se e antes de mudar para a última objetiva, pingou-se uma gota do óleo de imersão na lâmina contendo a amostra e mudou-se para a objetiva 100X e novamente focalizou-se.

Analisando os resultados:

- Activia (Bifidobacterium animalis) - observou-se a presença de cocos, diplococos e estaphylococus gram-positivos;

- Yakult – Observou-se a presença de bactérias gram-positivos;

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