O MÉTODO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL E COLORAÇÃO DE GRAM

UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA – UFBA

CAMPUS SALVADOR

ALLANA PEREIRA CASTELO COSTA

AMANDA CARVALHO DAS NEVES SANTOS

ÉMILE CAROLINE SANTOS DA SILVA

MÉTODO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL E COLORAÇÃO DE GRAM

Salvador- 2019

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ALLANA PEREIRA CASTELO COSTA

AMANDA CARVALHO DAS NEVES SANTOS

ÉMILE CAROLINE SANTOS DA SILVA

MÉTODO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL E COLORAÇÃO DE GRAM

Trabalho apresentado como pré-requisito para avaliação e obtenção de nota na disciplina Microbiologia dos Alimentos II do Curso de Nutrição da Universidade Federal da Bahia – UFBA, Campus Salvador.

 Orientador (a) Prof.: Dr. Mariana Roselino

Salvador- 2019

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MÉTODO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL E COLORAÇÃO DE GRAM

1. Introdução

 O método do número mais provável (NPM) permite determinar o número de microrganismos (MOs) em uma amostra, utilizando tabelas de probabilidade. Tem como base o seguinte princípio: quanto maior o número de bactérias em uma amostra, maior o número de diluições necessárias para reduzir a densidade até um ponto no qual mais nenhuma bactéria esteja presente nos tubos de diluição seriada. É utilizado quando os MOs não crescem em meio sólido ou quando o crescimento de bactérias em meio líquido diferencial é utilizado para reconhecer MOs.
Diluições decimais da amostra líquida, neste experimento a amostra foi água, são inoculadas em séries de tubos contendo meio líquido selectivo. Os tubos são positivos quando têm crescimento e/ou produção de gás de fermentação. O NMP fornece somente uma estimativa de 95% da probabilidade de a população bacteriana estar em uma faixa determinada. (TORTORA, 2016 p.175)

A coloração de Gram é uma coloração diferencial, desenvolvida pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram, que classifica as bactérias em dois grandes grupos: gram-positivas e gram-negativas, com base na composição e propriedades físico-químicas das estruturas da parede celular. (TORTORA, 2016 p.69)

2. Objetivo

 Identificar o número de microrganismo numa amostra de água a partir da produção de gás pela fermentação e identificar o tipo de bactéria na amostra de staphylococcus aureus com base na coloração de Gram.

3. Metodologia

3.1 Materiais utilizados para NMP:

-Tubo de ensaio;       -Caldo verde brilhante bile lactose a 2% - Caldo VBBL;                          

-Pipeta                      -Lamparina;                   - Água do bebedouro da UFBA.

3.2 Materiais utilizados para coloração de Gram:

-Cristal violeta;          - Álcool;                         -Lugol;                      -Fucsina;

-Água;                       -Lâmina;                        -Alça;                        -Solução salina;

-Microscópio.

4. Procedimentos

Para a realização do método de número mais provável, utilizou-se 6 tubos de ensaio que continha caldo VBBL, 3 desses tubos foram marcados como 10-1 e os outros 3 como 10-2. Feito isso, coletou-se a amostra de água do bebedouro da ufba e transferiu 1ml para cada tubo marcado como 10-1. Com a mesma pipeta, transferiu-se 1ml da amostra contida nos tubos 10-1 para cada tubo marcado como 10-2.

Reservou-se os tubos pra posterior análise na semana seguinte.

Para o método de coloração de Gram, pegou-se uma lâmina e adicionou uma gota de solução salina, em seguida coletou uma colônia da amostra de staphylococcus aureus com a alça e preparou o esfregaço e fixou na chama. Recobriu o esfregaço fixado pelo calor com o cristal violeta, corante primário que impregna todas as células e deixou agir por 1 minuto. Após esse tempo, lavou-se o esfregaço com água  e recobriu com o lugol e deixou agir por 1 minuto também. Passado esse tempo, retirou-se o excesso com água e lavou-se com álcool, um a gente descolorante que remove a cor púrpura das bactérias gram-negativas. Em seguida recobriu-se a lâmina com corante fucsina e deixou por 30 segundos. Lavou-se a lâmina, esperou secar e observou-se no microscópio.