O Protocolo Lâmina Histológica

Protocolo para realizar lâmina histológica.

1º Passo: Corte

BRANQUIA

-Realizar o corte do material em relação ao que você deseja visualizar, para as brânquias, o melhor corte a se realizar é o que permite a vista Latero-lateral (LL) das brânquias. Através desse ponto de vista se pode ver o arco branquial e as fileiras de revestimento de braquispinhas. O tecido epitelial estratificado da base das brânquias não costuma apresentar mudanças significativas, por isso, não é tão digno de atenção.

FÍGADO

-Realizar o corte do material em relação ao que você deseja visualizar. Para peixes, todo o fígado é interessante, pois nele pode-se notar a forma dos hepatócitos, a estrutura da arquitetura hepática e diversas lesões que podem estar correlacionadas com o estado de vida do animal.

-Recomenda-se que leve o fígado íntegro para uma lupa, onde se analisa o estado macroscópico aumentado do fígado, assim, o pesquisador pode optar por fazer um corte longitudinal ou um corte transversal para se buscar um melhor resultador

2º passo: Desidratação.

BRÂNQUIA

-Utilizar uma bateria de processamento com diferentes concentrações de álcool, o melhor para brânquia é entre 25-30 minutos, mais do que isso, o material costuma ficar ressecado, o que atrapalha a visualização.

FÍGADO

-Utilizar uma bateria de processamento com diferentes concentrações de álcool, o melhor para fígado está entre 40 e 45 minutos, tempos abaixo desse costuma deixar o material relativamente hidratado, o que pode dificultar as partes de parafinização do processo.

• Álcool 70%
• Álcool 80%
• Álcool 90%
• Álcool 95%
• Álcool 100%
• Xilol I
• Xilol II

OBS: De acordo com a bula do álcool absoluto, a mudança da porcentagem de álcool especifico para histologia pode ser muito brusca do álcool 90% para o absoluto, por isso sugere-se que passe pelo álcool 95%.

OBS²: Independente de qual seja o tempo escolhido para desidratação, todos os materiais devem passar o mesmo tempo na bateria.

OBSmo tempo na bateria.

OBS³: Brânquia e Fígado tem tempo de desidratação diferentes, não é recomendado realizá-los em conjunto.

3º Passo: Parafinização.

-Leve a parafina a estufa a 60º por 24h ou 45º a 72h, cuidado para não esquentar demais, pois a parafina derretida pode queimar seu material.

-Coloque seu material na parafina, já em cassetes identificados.

-Espere a parafina endurecer, depois retorne o material para a estufa, onde ele ficará por mais 24h a 60°

OBS: Cuidado com essa última parte, pois depois que a parafina derrete, ela começa a ferver e seu material pode cozinhar, por isso esteja sempre ao lado da estufa pelo menos nas últimas 6h.

4º Passo: Desparafinização

-Faça o material passar pela bateria de desidratação reversa, com o mesmo tempo utilizado no primeiro.

-Com auxílio de um dispensador de parafina, monte seus blocos com seu material.