Como Trabalhar com o Microscópio

[pic 1]UNIVERSIDADE ESTADUAL DO OESTE DO PARANÁ

CENTRO ENGENHARIA E CIÊNCIAS EXATAS - CECE

ENGENHARIA QUÍMICA

PRÁTICA 03 – Como trabalhar com o microscópio

Maio de 2016

TOLEDO-PR

BRUNA THAIS STUANI

FÁBIO AUGUSTO LEITE

LETÍCIA THAÍS DE OLIVEIRA CALDEIRA

PRÁTICA 03 – Como trabalhar com o microscópio

Relatório de aula prática apresentado à disciplina de Microbiologia Industrial, para obtenção de nota parcial do curso de graduação em Engenharia Química - Universidade Estadual do Oeste do Paraná - campus Toledo.

Professora Dra. Monica L. Fiorese

Maio de 2016

TOLEDO-PR

1. INTRODUÇÃO

A microscopia óptica permite a observação das estruturas encontradas na natureza como uma extensão natural da observação a olho nu.  O primeiro microscópio foi o óptico depois deste, muitos outros modelos foram aperfeiçoados para as mais variadas aplicações. Para a melhor utilização do microscópio foram formalizadas diversas técnicas, como a utilização de corantes, fixadores, micrótomo, esfregaço, esmagamento. As diferentes técnicas utilizadas dependem da finalidade laboratorial.

Na microscopia ótica existem dois tipos de microscópios os simples e o composto, o simples é caracterizado por uma lente de aumento que permite aumentar uma partícula vezes a mais que o seu tamanho real. Já os microscópicos compostos são mais poderosos permitindo até 2000 vezes o tamanho real da partícula.

O microscópio composto tem dois tipos de lentes a ocular e a objetiva, onde cada sistema de lentes produz um aumento. As lentes objetivas são descritas por sua distancia focal, distancia esta do objeto até a lente. Antes da imagem chegar ao observador, esta sofre outra ampliação pelas lentes oculares. Um bom meio para trabalhar com grandes aumentos e alta resolução e colocar entre o objeto e a objetiva um meio diferente, que geralmente é o óleo que tem o índice de refração maior que o ar.

Vários componentes de um microscópio são responsáveis por desempenhar funções individuais levando a seu objetivo final que é a ampliação do objeto observado.Seus principais componentes são as lentes oculares e objetivas, pinça, platina, diafragma, fonte de iluminação, condensador, revolver e os parafusos macrométricos e micrométricos.

O princípio do microscópico de luz está relacionado com a incidência de luz sobre a amostra a ser analisada, sobre um conjunto de lentes de ampliação que se baseia na singularidade do comprimento de onda irradiado, e na abertura do conjunto de lentes, os quais definem o poder de resolução.

Para se obter uma melhor resolução é utilizado o óleo de imersão, que tem como objetivo evitar a dispersão dos raios luminosos quando estes atravessam o conjunto lâmina-óleo. Isso ocorre devido ao fato de o óleo possuir um índice de refração similar ao vidro. Quando o óleo de imersão não é utilizado, os raios de luz são refratados e a lente objetiva precisaria ter um diâmetro maior para capturar a maior parte dos raios de luz.

Para a análise de micro-organismos que não podem ser corados por métodos-padrão ou que tem suas características distorcidas pela coloração, é utilizado o microscópio de campo escuro. Difere de um microscópio óptico comum em seu condensador , que é um condensador de campo escuro que contém um disco opaco. Já a microscopia de fluorescência vale-se da capacidade das substâncias absorverem curtos comprimentos de ondas de luz  e com isso produzirem luz em um comprimento de onda visível. A microscopia confocal é utilizada para reconstruir imagens tridimensionais, para isso as amostras são coradas com fluorocromos para que emitam, ou devolvam a luz. (TORTORA, 2009)

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1. OBJETIVOS

Discutir a importância, funcionamento e utilização de um microscópico óptico em um laboratório microbiológico, exaltando pontos de utilização, os componentes deste equipamento e, compostos e técnicas empregados para a ampliação do corpo observado.

1. DISCUSSÕES

O microscópico é um equipamento que foi inventado no século XVI, e ao passar dos séculos foi aperfeiçoado com objetivo de atender a biologia básica, diagnósticos médicos, ciências dos materiais, entre os avanços, pode ser citado à inserção de uma fonte luminosa a baixo da amostra a ser observada, tais microscópicos são denominados microscópicos luminosos e são baseados no princípio de captação de luz em uma área minúscula bem iluminada, diminuindo assim, os requisitos para observação exigidos pela lente objetiva.

A microscopia de campo claro possui o tipo de iluminação produzido pelos microscópios ópticos comuns, o microscópio óptico composto (MO). Neste tipo de microscópio, a luz segue uma trajetória que se inicia na fonte luminosa e termina no olho do observador. Mas até chegar aos olhos, após sair de sua fonte luminosa, esta, passa por diversos elementos ópticos.  Raios de luz partem do iluminador, passando então pelas lentes do condensador que direcionam os raios de luz pela amostra analisada. Posteriormente passam pelas lentes objetivas, que são as lentes mais próximas da amostra, e direcionadas a um prisma onde a trajetória sofrerá varias mudanças de direção, até finalmente chegarem as lentes oculares onde novamente a imagem sofre ampliação.

A resolução de um microscópio pode ser definida como a capacidade que suas lentes possuem em diferenciar estruturas e os detalhes da mesma. Deste modo, o limite de resolução é a capacidade máxima do microscópio em separar detalhes, e refere-se então, mínima distancia necessária entre dois pontos, de modo que estes apareçam individualizados. O fator determinante da riqueza dos detalhes da amostra analisada por um microscópio é o seu limite de resolução, que depende essencialmente das lentes objetivas e do comprimento de luz utilizado.

Em um microscópio, existem dois sistemas de focalização da amostra, a focalização comum e a focalização fina. O primeiro sistema consiste de um mecanismo de direção que move o plano de amostra. No primeiro passo para a obtenção da imagem da amostra utiliza-se este tipo de focalização. A partir daí, utiliza-se a focalização fina onde os movimentos são precisamente controlados para se obter uma profundidade de foco usando as lentes objetivas.

O sistema de iluminação de um microscópio pode estar situado abaixo ou acima do plano de amostra. Os microscópios invertidos são os que possuem a iluminação no plano superior da amostra e é muito utilizado em análise de amostras opacas. No modo de iluminação de campo claro e invertido, a luz viaja ao longo do eixo óptico, através da objetiva em direção à amostra que está sendo observada e a amostra é visualizada pela luz que ela reflete.