Relatório de Aula Pratica - Clostrídios Sulfito Redutores

Beatriz Silva Sanchez

Relatório de aula pratica - Clostrídios sulfito redutores

Introdução

Os Clostrídios sulfito redutores são bacilos, Gram positivos, anaeróbios estritos, aptos a formarem esporos e apresentam atividade sulfito redutora. O Clostridium perfringens é uma bactéria patogênica cujas doenças transmitidas por alimentos são classificadas em dois grupos de risco. As cepas do tipo A, muito comuns, são classificadas como perigo moderado, de curta duração e sem ameaça de morte. Já as cepas do tipo C (enterite necrótica), muito mais raras, inclui as doenças de perigo severo, com ameaça de morte, sequelas crônicas ou de longa duração

Matérias utilizados

• Jarra de anaerobiose  

• tubo de falcon

• tubo cônico

• pipeta graduada e pipeta automatica

• Bisturi

• placa de petri

• estufa de incubação 

• Agar

Métodos

1.  Preparação da amostra é feita a partir da retirada de aproximadamente 1,0 a 2,0 g de alimento.

2- Transferir a porção para a placa de petri estéril

3- Com o bisturi pince finamente  

5- Inserir em 10ml de solução salina tampar com fosfato em um tubo cônico de 15ml

6- 5 ml da solução irão para um tubo de falcon que contem 10ml de RPM, será possível ver a presença de células vegetativas

7- O restante de 5ml será submetido a um choque térmico em aquecimento no banho maria durante 15min em uma temperatura de 85°C. No tubo de falcon com 10ml de RPM, mostrará presença de esporos

8- Os dois tubos bem fechados irão por 24h na B.O.D a 37°C.

9- A técnica sanduiche chapeamento será feita com uma pipeta graduada com 10ml do meio de cultura, transferir para uma placa de petri. Depois com uma pipeta automática pegamos 100μL. Mais 10ml de RPM e mais amostra sem o choque térmico.

10-Espalhar os inoculos RPM usando grânulos de vidro esterilizados.

11- Esperar de 5 a 10min a temperatura ambiente para permitir que o RPM seja absorvido em ágar.

12- 20ml do meio de cultura para fazer a próxima camada utilizando uma pipeta graduada, aguardar solidificar completamente a temperatura ambiente. Colocar de cabeça para baixo em uma jarra de anaerobiose com a vela acesa.

13- Levar para a B.O.D por 48h a 37°C