Relatorio Cromatografia

CROMATOGRAFIA

É um método físico-químico de separação dos componentes de uma mistura. Baseia-se nas diferentes distribuições desses componentes em duas fases: Uma fase estacionária (que permanece parada) e uma fase móvel (que se movimenta no sistema). Durante a passagem da fase móvel os componentes serão seletivamente arrastados por ela e ao mesmo tempo retidos pela fase estacionária, ocasionando diferentes migrações e diferentes posições dos componentes da mistura.

CROMATOGRAFIA EM PAPEL

A cromatografia em papel (CP) é uma técnica de partição líquido–líquido, estando um deles fixado a um suporte sólido. Baseia-se na diferença de solubilidade das substâncias em questão entre duas fases imiscíveis, sendo geralmente a água um dos líquidos. O solvente é saturado em água e a partição se dá devido à presença de água em celulose (papel de filtro). Este método, embora menos eficiente que a CCD, é muito útil para a separação de compostos polares, sendo largamente usado em bioquímica.

• Técnica simples;

• Pequena quantidade de amostra;

• Boa capacidade de resolução;

• Separação e identificação de compostos polares, como antibióticos hidrossolúveis, ácidos orgânicos e íons metálicos.

• Geralmente água é utilizada como fase móvel e papel (celulose) como fase estacionária.

A forma mais simples de CP é a cromatografia ascendente (por capilaridade), na qual foi usada na sala de aula. Os materiais usados foram: 10 ml de álcool metílico, vidro relógio, béquer, canetinhas coloridas (azul, verde e preto) e papel filtro.

Foi colocado o álcool metílico dentro do béquer, em seguido foi introduzido o papel com três pontos distintos e colorido no béquer, foi tampado com o vidro relógio e foi percebido que o liquido era absorvido por capilaridade até seu estágio máximo. Em seguida foi feito uma mistura de cores colocando novamente ao béquer, e foi observada uma dificuldade das cores ao se dissipar, mais lento o processo de deslocamento da linha. Assim, podemos concluir que o primeiro experimento as misturas eram puras e por isso não teve dificuldade ao se dissipar, sendo que eram cores diferentes, sem qualquer outra mistura.

CROMATOGRAFIA DE CAMADA DELGADA (CCD)

Consiste na separação dos componentes de uma mistura através da migração diferencial desses componentes quando arrastados pela fase móvel (solvente) sobre uma camada delgada de adsorvente. Oferece separação em breve espaço de tempo, é versátil, apresenta grande reprodutibilidade, é de fácil execução. Por todas estas vantagens, é indispensável em laboratórios que realizam análise de substâncias orgânicas e organometálicas. É mais usada na separação de substâncias hidrofóbicas.

Classificação: de acordo com o mecanismo de separação esta cromatografia é classificada, de um modo geral, como sendo uma cromatografia de ADSORÇÃO. De acordo com o estado físico das duas fases é também classificada como uma cromatografia líquida-sólida.

Mecanismo de separação dos componentes: está fundamentado no fenômeno de ADSORÇÃO, que é o depósito ou a retenção seletiva de substâncias sobre a superfície de sólidos finamente divididos, por efeitos de forças eletrostáticas. Os adsorventes mais usados são: a sílica (SiO2) e a alumina (Al2O3). A sílica é um sólido, altamente poroso, e é um dos adsorventes mais utilizados em cromatografia. Existem vários tipos no mercado. Alguns tipos “Merck”: sílica “G” - apresenta em sua composição substâncias aglutinantes (10 a 15% de gesso ou 1 a 3% de amido) com o objetivo de fixar o adsorvente sobre a placa de vidro; sílica “H”- não contém aglutinantes. É usada em cromatografia de coluna; sílica “F”- contém substância fluorescente; sílica “P”- para uso em camadas Preparativas.

Fase móvel: o solvente ou mistura de solventes tem papel fundamental na separação de misturas. Entende-se que existe uma competição entre as moléculas da fase móvel e da amostra, pela superfície do adsorvente. Portanto, a escolha da fase móvel tem que considerar a natureza química das substâncias a serem separadas e a polaridade da fase móvel. Deve-se tomar como base a “série eluotrópica “ dos solventes (solventes em ordem de polaridade). O poder de eluição está diretamente relacionado com a polaridade. Série eluotrópica (no final).

Aplicação das amostras na cromatografia: em geral usam-se soluções de 0,1 a 1,0%. Podem-se utilizar micropipetas ou micro seringas, que permitem determinar a quantidade de substâncias colocada nas placas. Quando não é exigida a quantidade de amostra pode-se usar capilares de vidro. As gotas devem ser aplicadas 1,5 a 1,0cm acima da borda inferior da placa (ponto de partida).

Reveladores cromatográficos: são agentes físicos (ultravioleta, por exemplo) ou químicos (vapores de iodo, H2SO4, por exemplo) que tornam visíveis as substâncias separadas.

Constantes cromatográficas: são características reproduzíveis em um dado sistema cromatográfico. Por exemplo Rf (Rate of flow) que é a relação de deslocamento dados pela relação de deslocamento do soluto pelo deslocamento do solvente.

Série eluotrópica

- pentano

- éter de petróleo

- ciclohexano

- benzeno

- clorofórmio

- éter etílico aumento da polaridade

- acetato de etila

- acetona

- propanol

- etanol

- metanol

- água

CROMATOGRAFIA EM COLUNA

Os métodos cromatográficos líquido-sólido (adsorção) podem ser realizados numa coluna recheada com um sólido (fase estacionária) e uma fase móvel líquida, onde a adsorção ocorrerá entre as superfícies das fases móvel e estacionária. Dependendo do tamanho da coluna usada, é facilmente aplicada para fins preparativos, devendo ser monitorada, principalmente por cromatografia em camada delgada.

• Citada como o mais antigo procedimento cromatográfico.

• Utilizada para isolamento