Técnicas de Assepsia e preparo de meios de cultura PCA e PDA

Técnicas de Assepsia e preparo de meios de cultura PCA e PDA

1. Introdução

Os micro-organismos são universais. As correntes de ar carregam os micro-organismos das superfícies terrestres para a atmosfera, e de continente para continente. (PELCZAR JR., 1996)

Estamos expostos a microrganismos em qualquer ambiente, no laboratório microbiológico, esses microrganismos se não forem reduzidos, podem afetar negativamente os experimentos realizados alterando o resultado esperado no decorrer da prática. E para isso a técnica de manipulação asséptica é de grande importância para manter os meios de cultura ou matérias estéreis isentas de contaminação. O ambiente de trabalho deve estar o mais livre possível de microrganismos para se obter bons resultados.

Um dos principais contaminantes dentro de um laboratório de microbiologia é o analista, desta forma, técnicas de assepsia pessoal é de suma importância para a efetividade de uma análise microbiológica

A análise visual, com contagem padrão em placas terá como objetivo informar técnicas de assepsia e quão importância estas técnicas podem ser. Com todos os conhecimentos de assepsia, materiais e instrumentos, foi realizado por último um meio de cultura PCA e PDA para os microrganismos.

        

2. Objetivos

O objetivo da aula prática foi informar às técnicas de assepsia aos acadêmicos; os materiais e equipamentos utilizados e o preparo de um meio de cultura PCA e PDA para os microrganismos.

3. Material

• Dentre os materiais utilizados e apresentados em aula podemos citar: (q.s.p.) Meio de cultura PCA; (q.s.p) Meio de cultura PDA;
• Balança analítica;
• Água destilada;

• Bastão de vidro;
• Erlenmeyer;
• Algodão ou boneca;
• Papel pardo;
• Placas de petri esterelizadas;
• Autoclave;
• Estufas;
• Bico de Bunsen.

4. Metodologia

Em Microbiologia é importante a esterilização de meios, soluções e material de vidro ou metal que se utiliza, pois tudo é fonte de contaminação e consequentemente faz com que ocorram alterações na amostra ou pesquisa que está se realizando.

A finalidade da esterilização é tornar inativos ou remover todos os micro-organismos vivos. (LIGHTFOOT; MAIER, 2003)

Podemos obter essa assepsia através de gestos e atitudes tendentes a manterem o estado de ausência de micro-organismos contaminantes no meio em que actua.

• Higienizar bancada com álcool 70%;
• Higienizar mãos com sabonete líquido e sanitizar com álcool      70% (Para a realização da análise, um aluno deve ficar sem higienizar as mãos);
• Acender bico de bunsen;
• Seguir instruções dos rótulos dos meios de cultura (PCA        e PDA), e calcular para 100 ml de solução;
• Tampar o Erlenmeyer com algodão e lacrar com papel pardo;
• Autoclavar a 121ºC a 1 atm, por 15 minutos
• Após o resfriamento dos meios de cultura, despejar aproximadamente 20 ml nas placas de petri (aprox. 5 placas ou cobrir o fundo);
• Identificar os meios;
• Deixar próximo ao bico de bunsen, até que os meios solidifiquem.

 Após apresentados os materiais e equipamentos, o grupo preparou um meio de cultura, existem vários, mas o preparado em aula foi o meio de cultura PCA e PDA para microrganismos. E este foi feito da seguinte maneira:

1) Cada meio de cultura possui o seu método de preparar; cada método tem a sua “receita”. Assim o primeiro passo que os acadêmicos tiveram que realizar, foi calcular a quantidade necessária do meio de cultura PCA para 100 ml de água destilada.

Para descobrir, utilizamos a básica regra de três: No rótulo do meio de cultura PCA constava que para cada 23,5g deveria se utilizar 1000 ml de água destilada e para o PDA 39,0g para 1000ml de água destilada.

23,5 g de PCA ------ 1000 ml de água destilada

X g de PCA -------- 100 ml de água destilada

23,5 X 100 / 1000 = X: 2,35 g

39,0 g de PDA ------ 1000 ml de água destilada

X g de PDA -------- 100 ml de água destilada

39,0 X 100 / 1000 = X: 3,9 g

Logo, para 100 ml de água destilada deveremos usar 2,35g de meio de cultura PCA e para PDA 3,9 g.