UBIQUIDADE MICROBIANA INOCULAÇÃO MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM

SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO 3

2. MATERIAIS E MÉTODOS 4

2.1 PREPARAÇÃO DE MATERIAL DE LABORATÓRIO PARA UTILIZAÇÃO EM ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS (Etapa -1) 4

2.2 PREPARAÇÃO DOS MEIOS DE CULTURA 4

2.3 UBIQUIDADE MICROBIANA - PLAQUEAMENTO EM SUPERFÍCIE (Etapa-2) 5

2.4 INOCULAÇÃO (Etapa-3) 6

2.5 TÉCNICA DO ESFREGAÇO DE SUPERFÍCIE COM SWAB 7

2.6 COLORAÇÃO DE GRAM (Etapa-4) 11

3. RESULTADOS E DISCUSSÕES 12

4. CONCLUSÃO 15

1. INTRODUÇÃO

Neste relatório serão vistas algumas atividades relacionadas a microbiologia e foram desenvolvidas em 4 etapas (aulas presenciais). Da primeira etapa temos: Preparação de material de laboratório para a utilização em análises microbiológicas, Meios de cultura, Etanol 70% como desinfetante para uso geral. Para a segunda etapa, foram desenvolvidas atividades relacionadas a: Ubiquidade Microbiana, tais como: Plaqueamento em superfície; técnica do esfregaço de superfície com swab. Na terceira etapa, dando continuidade à Ubiquidade microbiológica as atividades desenvolvidas foram: Inoculação; Incubação; Resultados. Para a quarta e última etapa foram realizados ensaios envolvendo o Método de coloração de Gram.

2. MATERIAIS E MÉTODOS

2.1 PREPARAÇÃO DE MATERIAL DE LABORATÓRIO PARA UTILIZAÇÃO EM ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS (Etapa -1)

Primeiramente é importante citar que nos experimentos envolvendo microbiologia a higienização de superfícies, materiais e pessoas são de extrema importância para o correto procedimento e posterior análise de resultados. Para tanto, deve-se sempre higienizar a superfície e mãos com Álcool 70% e quaisquer ferramenta ou objeto que não tiver em situação estéril, evitar falar durante os procedimentos para com isso evitar que partículas de saliva ou mesmo a corrente de ar produzida pela fala arraste algum interferente ao ensaio. A esterilização das vidrarias é feita por meio da utilização do equipamento denominado autoclave, onde primeiramente, limpos os materiais são embrulhados e identificados em papel Kraft e identificado também o local a ser aberto após tempo em equipamento, para assim evitar qualquer contato com as mãos. Após a preparação prévia dos objetos este são acondicionados na autoclave e devem permanecer a 121ºC por tempo mínimo de 15 minutos, para garantir o procedimento.

2.2 PREPARAÇÃO DOS MEIOS DE CULTURA

Prepara-se duas soluções, onde a solução de ágar padrão para contagem (PCA) possui um meio seletivo para bactéria (conforme pode ser visto na figura 1) e a segunda solução é a ágar batata dextrose (SDA) a qual possui meio seletivo para bolores e levedura (conforme pode ser visto na figura 2).

Figura 1. Solução de PCA. Figura 2. Solução de SDA.

Fonte: Autores. Fonte: Autores.

Realiza-se a reidratação em frasco de material inerte e tamanho adequado da seguinte forma: pesou-se o PCA e transferiu-se para o frasco contendo água até atingir concentração de 23,5g/l, aquecido levemente utilizando água aquecida do banho termostatizado e com boa agitação para desfazer os grumos. O mesmo procedimento foi utilizado para o BDA, porém a concentração final foi de 39g/l.. Após a homogeneização da solução, os frascos foram aquecidos utilizando o micro-ondas e o bico de Bunsen, até o líquido ficar translúcido.

Após o preparo das soluções (meio de cultura), faz-se a esterilização do conjunto frasco/solução embalando em papel Kraft e identificando, por meio da autoclave.

2.3 UBIQUIDADE MICROBIANA - PLAQUEAMENTO EM SUPERFÍCIE (Etapa-2)

Para a atividade de plaqueamento de superfície, foi utilizada a Câmara de Fluxo Laminar, onde as placas de Petri e os meios de cultura, foram manuseados dentro desta com radiação de luz UV e fluxo de ar laminar porá evitar contaminação pelo ar e pelo analista da amostra, foi deixado por aproximadamente 15 minutos sem interferência para se realizar a descontaminação.

Após esse tempo, higieniza-se as mãos e a bancada com álcool 70% e acede-se a chama do bico de Bunsen, para criar um ambiente menos propenso a contaminação, então verte-se os meios de cultura nas placas de Petri o mais próximo da chama possível e evitando a fala ou qualquer ato que possa ocasionar contaminação ao meio. Utilizando 10 placas contendo PCA e 10 contendo BDA, aguardando-se até a secagem das mesmas. Como mostra figura abaixo.

Figura 3: Preparo das soluções em placas de Petri.

Fonte: Os autores.

Após secas e em temperatura ambiente , as placas foram agrupadas e envoltas em um filme plástico, e armazenadas sob refrigeração controlada (5±3ºC) por uma semana.

2.4 INOCULAÇÃO (Etapa-3)

Escolhe-se dois lugares para realizar a pesquisa dos micro-organismos no ar, estes f locais foram: a cantina do campus 2 da FURB e o banheiro do terceiro andar do bloco I da FURB. No local preestabelecido foi posicionado duas placas de Petri contendo cada uma um tipo de meio( PCA e BDA) e ali foram abertas e deixadas pelo tempo de 15 minutos.

Para a pesquisa de micro-organismo em objeto utilizou-se 3 objetos, sendo eles: um brinco, um anel e chave. Colocou-se o objeto dentro da placa e manteve-se lá pelo tempo de 15 minutos. Após este tempo retirou-se o objeto evitando qualquer contaminação por outro meio a não ser o objeto em estudo e identificou-se cada placa com o tipo de meio, equipe e objeto.

As placas com BDA foram posicionadas não invertidas em estufa