A AÇÃO DE DIFERENTES TEMPERATURAS

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Curso Técnico em Química

Microbiologia II

AÇÃO DE DIFERENTES TEMPERATURAS SOBRE MICRORGANISMOS

NOME : THAÍS FERREIRA MACIEL

TURNO: NOTURNO

PROFESSOR(A): CÍNTIA NEVES

DATA DA EXPERIÊNCIA: 09/02/2022 – 14/02/2022 – 16/02/2022 – 21/02/2022 – 23/02/2022

LOCAL DA EXPERIÊNCIA : LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA

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1 - Objetivos

• Preparar meios de cultivo líquidos e solidificados;
• Esterilizar e plaquear meios de cultivo solidificados;

-Avaliar        as        alterações        promovidas        no        meio        líquido        a        partir        do        crescimento        de microrganismos;

• Avaliar o efeito de diferentes temperaturas sobre os microrganismos;
• Realizar a técnica do esgotamento do inóculo;
• Realizar coloração de Gram e,
• Realizar coloração de endósporo bacteriano.
• Observar o material por imersão em microscópio óptico.

2- Materiais, vidrarias e utensílios

- Papel Kraft;

- Algodão hidrófilo;

- Bucha de algodão hidrófobo e gaze;

- Micropipeta automática, 10 mL;

- 2 Tubos de ensaio 10x100 mm com tampa rosqueável;

- 5 Tubos de ensaio 10x150 mm com tampa rosqueável;

- Fósforo;

- Estante de madeira para tubos de ensaio com 30 furos;

- Erlenmeyer, 125 mL;

- Barbante;

- Tela de amianto;

- Etiqueta de identificação;

- Alça de Nichrome;

- 3 placas de Petri,12 cm;

- 2 Lâminas;

- Suporte de madeira para lâminas e lamínulas;

- Pipeta Pasteur;

- Tripé;

- Tesoura;

- Fita de Autoclavagem;

- Papel de filtro;

- Proveta graduada, 100 mL;

- Frasco de Borosilicato com tampa rosqueável, 500 mL;

- Suporte para coloração;

- Pissete;

-Becker, 250 mL;

- Lápis;

- Becker, 50mL;

- Espátula metálica, tipo canaleta;

- 3 ponteiras, 10 mL;

- 5 Becker de alumínio, 1000 ml;

- Termômetro graduado, 10° C a 110°C;

- Luva nitrílica;

- Suporte para coloração;

- 3Bastão de vidro;

- Papel de filtro;

1. Equipamentos

- Microscópio óptico binocular composto, 110 V;

- Bico de Bunsen;

- Autoclave vertical, 220V – Phoenik, 1,1atm, 121°C;

- Chapa de aquecimento, 220 V;

- Geladeira;

- Estufa bacteriológica, 220V, 37°C,Vertival-Olidefcz;

- Estufa bacteriológica,110V,45°C, Vertical;

- Balança semi-analítica

1. Reagentes e soluções

- Solução de cristal violeta, 1%m/v;

- Solução de lugol;

- Solução de álcool etílico, 92°GL;

- Solução de safranina 1% m/v;

- Solução de safranina 5% m/v

- Solução de verde malaquita, 5% m/v;

- Água, H2O;

- Óleo de cedro;

- Solução de Cloreto de Sódio, NaCl, 0,5%(m/v) esterelizada;

1. Meios de cultivo

- Agar para contagem de microrganismos;

- Caldo nutritivo de extrato de leveduras;

1. Amostra

- Terra de jardim

7 – Procedimento

1. Preparo do meio de cultivo líquido

Calcular a quantidade necessária de extrato de carne para preparar o volume desejado de solução. Pesar em Becker a quantidade calculada do meio de cultivo, de acordo com a especificação do fabricante. Acrescentar água deionizada medida numa proveta e agitar com bastão de vidro até total dissolução do meio. Distribuir o volume de meio especificado pelo professor para Erlenmeyer de 125 mL utilizando uma proveta graduada. Fechar o Erlenmeyer com auxílio de uma bucha de algodão.

Envolver a parte da boca do Erlenmeyer com papel apropriado, amarrando-o com barbante, identificando-o e em seguida, esterilizá-lo em autoclave. Após autoclavação

(121ºC/1,1 atm - 15 minutos), deixar esfriar e armazenar o material em geladeira até posterior utilização.

1. Preparo de meio de cultivo solidificado

Calcular a quantidade necessária de meio de cultivo agar para contagem de microrganismos (APC) para preparar o volume desejado de meio. Pesar em Becker a quantidade calculada do meio de cultivo APC, de acordo com a especificação do fabricante. Acrescentar água destilada ou deionizada com auxílio de uma proveta.

Aquecer o meio (já pesado e adicionado de água deionizada) até sua fervura (100ºC) com o objetivo de dissolver o agar presente. Um minuto é o tempo máximo permissível de aquecimento a 100ºC para evitar que o meio concentre.

Após dissolução do meio, transferir para frascos apropriados para acondicionamento de meios de cultivo, enroscar sua tampa e dar meia volta para trás e envolvê-lo com papel apropriado. Identificar o material.

Após autoclavação (121ºC - 15 min.), manter os meios em estufa previamente regulados a 50ºC para que não haja solidificação antes do plaqueamento. Plaqueamento - plaquear significa distribuir os meios a serem solidificados em placas de Petri que foram previamente esterilizadas. Este procedimento pode ser feito utilizando-se pipetas estéreis ou simplesmente derramando o meio de cultivo na quantidade necessária para cobrir o fundo da placa de Petri (em torno de 20 mL).