DETERMINAÇÃO ESPECTROFOTOMÉTRICA DA CREATININA URINÁRIA

DETERMINAÇÃO ESPECTROFOTOMÉTRICA DA CREATININA URINÁRIA

1 - Referência

Análise realizada através do KIT da  Bioclin®

2 - Método Analítico

        

•  Diluição da amostra: pipetar 0,1 mL da amostra de urina, transferir para um tubo de ensaio e adicionar 2,4 mL de água destilada (diluição 1:25). Agitar.

• Rotular 3 cubetas de ensaio como Br (branco), Ad (amostra diluída), Pa (padrão) e seguir a sequência seguinte:

	Branco	Amostra diluída	Padrão
reagente alcalino (mL)	2,0	2,0	2,0
água destilada (mL)	0,25	-	-
urina diluída (mL)	-	0,25	-
solução padrão (mL)	-	-	0,25
ácido pícrico (mL)	0,5	0,5	0,5

 

•  Agitar os tubos e deixá-los em repouso por 20 minutos à temperatura ambiente ou por 10 minutos a 37ºC.

•  Ler as absorbâncias da amostra diluída (Ad1) e do padrão em 510 nm, zerando o aparelho com o branco.

• Adicionar aos tubos Br e Ad, 100μL de acidificante, homogeinizar e deixar à temperatura ambiente por 5 minutos.

• Ler a absorbância da amostra diluída (Ad2) em 510 nm, zerando o aparelho com o branco.

•  Calcular a concentração de creatinina, expressa em g/L com o auxílio do fator de calibração (fc), utilizando a seguinte fórmula:

                                [Am] = fc x (AAd1 -AAd2) x 25   sendo:

[Am] = concentração de creatinina na amostra                           fc =  concentração do padrão    

Ad1 = absorbância 1 da amostra diluída                                           absorbância do padrão

Ad2= absorbância 2 da amostra diluída

25 = fator de diluição

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