DETERMINAÇÃO ESPECTROFOTOMÉTRICA DA CREATININA URINÁRIA
Por: isaahb • 19/10/2015 • Trabalho acadêmico • 323 Palavras (2 Páginas) • 489 Visualizações
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DETERMINAÇÃO ESPECTROFOTOMÉTRICA DA CREATININA URINÁRIA
1 - Referência
Análise realizada através do KIT da Bioclin®
2 - Método Analítico
Diluição da amostra: pipetar 0,1 mL da amostra de urina, transferir para um tubo de ensaio e adicionar 2,4 mL de água destilada (diluição 1:25). Agitar.
Rotular 3 cubetas de ensaio como Br (branco), Ad (amostra diluída), Pa (padrão) e seguir a sequência seguinte:
Branco | Amostra diluída | Padrão | |
reagente alcalino (mL) | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
água destilada (mL) | 0,25 | - | - |
urina diluída (mL) | - | 0,25 | - |
solução padrão (mL) | - | - | 0,25 |
ácido pícrico (mL) | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Agitar os tubos e deixá-los em repouso por 20 minutos à temperatura ambiente ou por 10 minutos a 37ºC.
Ler as absorbâncias da amostra diluída (Ad1) e do padrão em 510 nm, zerando o aparelho com o branco.
Adicionar aos tubos Br e Ad, 100μL de acidificante, homogeinizar e deixar à temperatura ambiente por 5 minutos.
Ler a absorbância da amostra diluída (Ad2) em 510 nm, zerando o aparelho com o branco.
Calcular a concentração de creatinina, expressa em g/L com o auxílio do fator de calibração (fc), utilizando a seguinte fórmula:
[Am] = fc x (AAd1 -AAd2) x 25 sendo:
[Am] = concentração de creatinina na amostra fc = concentração do padrão
Ad1 = absorbância 1 da amostra diluída absorbância do padrão
Ad2= absorbância 2 da amostra diluída
25 = fator de diluição
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