MATERIAL E MÉTODOS PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

MATERIAL E MÉTODOS

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

• Prática de produção de meio de cultura

Inicialmente pesou-se em um Erlenmeyer 3,76 g do meio sólido - EMB AGAR, LEVINE equivalente para preparar 100mL de solução. Dissolvemos prioritariamente em 40 mL de água destilada e após a dissolução juntamos ao erlenmeyer 60 mL de água agitando com auxílio de um bastão de vidro. Tendo em vista a total solubilização do meio ágar em água colocamos o erlenmeyer sob uma tela de amianto onde foi submetido a chama da lamparina. Quando solubilizara o meio ágar tapamos o erlenmeyer com o tampão de algodão e reservamos.

A fim de preparar uma solução de 100 mL do meio de cultura líquido EC Broth, pesamos 3,71g em um erlenmeyer de 250 mL. Foram adicionados consecutivamente ao erlenmeyer 40 mL e 60 mL de água destilada para preparar o meio. Em seguida, com uma pipeta volumétrica de 10 mL, coletamos 5 amostras de 10 mL do caldo as quais foram depositadas em tubos de ensaio e em cada tubo de ensaio colocamos tubos de durhan. Estes são tubos de ensaio menores introduzidos em tubos de ensaio maiores que servem para verificar a formação de gás pelo meio.

        Levamos ao micro-ondas o meio sólido (ágar) a fim de fundi-lo, o procedimento foi feito em etapas no micro-ondas de entre 30s e 60s, controlamos para que não houvesse a fervura do meio. Quando o meio estava fundido o depositamos ainda quente em uma placa de Petri que foi identificada e reservada para a solidificação do meio.

• Prática de técnicas de semeadura.

Tendo em vista que faz-se necessário a higienização e esterilização da bancada e dos utensílios para a realização da prática de semeadura assim fizemos. Com álcool esterilizamos a bancada e, flambamos na lamparina a boca dos tubos de ensaio e alça de platina.

Numeramos os tubos de ensaio conforme cada bactéria que ali se encontrava. Trabalhamos com 3 tubos de ensaio e 4 placas de Petri.

Os dois primeiros tubos de ensaio que continham os meios líquido TSB e EC foram depositados, com a alça de platina (esterilizando antes e após o processo), as colônias cultivadas em placa: Tsas S. Agalactae e E. Coli, respectivamente. No terceiro tubo, o qual continha o meio sólido E.Coli inclinado, fora transferido o meio líquido cultivado A.N, por meio da técnica de estria depositamos o meio líquido sob o meio sólido.

A primeira placa foi demarcada em três quadrantes e sob o meio de cultura sólido TSA que ali continha-se espalhamos o inoculo cultivado, fora espalhado em estrias múltiplas de acordo com a demarcação da placa. Na segunda placa que estava o meio EMB sólido, preparado no procedimento de produção dos meios, foi transposto a bactéria E. Colli, por meio de estriamento simples. A terceira placa onde estava o meio sólido EMB foi depositado 0,1 mL da cultura com uma pipeta automática estéril e espalhamos toda a cultura depositada com uma alça Drigalsky Em uma quarta placa de Petri colocamos com uma pipeta estéril 1 mL de amostra de água e em seguida viramos o erlenmeyer transferindo um pouco do meio fundido, os homogeneizamos realizando movimentos de infinito (∞) com a placa sobre a bancada – todo esse processo fora realizado na capela.