A Pratica Micrótomos

Aula Prática: Controle de qualidade microscópico de drogas vegetais – Coloração de cortes histológicos

Obtenção de lâminas com cortes vegetais para estudo histológico

Tipos de cortes: transversal e ou longitudinal

Amolecimento do material vegetal

Normalmente os órgãos vegetais empregados no comércio se apresentam secos, sendo necessário amolecê-los previamente para a realização do corte histológico e posterior observação ao microscópio. Para isso utiliza-se o tratamento dos cortes com água quente. O tempo necessário para o amolecimento de cada órgão vegetal varia de acordo com a sua textura. Tratando-se de órgão recém-colhido, apenas os de consistência mais firme necessitam de tal tratamento.

Método de hidratação para materiais secos

- colocar a amostra em solução de hidratação preparada com 5 partes de água, 4 partes de etanol, 1 parte de glicerina e 5 gotas de detergente comercial para cada 200 mL de solução. Manter posteriormente o material em estufa a 60 °C, no mínimo por 48 horas.

Realização do corte histológico: método manual com o uso de lâmina de barbear ou com o auxílio do micrótomo de Ranvier.

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Coloração dos cortes histológicos: método da dupla coloração

- utilização de dois corantes que possuem diferentes afinidades pelos tecidos vegetais.

Marcha de coloração:

- transferir os cortes para vidro de relógio contendo água destilada

1 - hipoclorito de sódio

2 - KOH 2% (caso o material contenha muito amido)

3 - solução acética

4 - água destilada

5 - 1º corante

6 - álcool 90

7 - água destilada

8 - 2º corante

9 - água destilada

Corantes: *

1º corante – azul de Alcian

2º Corante – safranina

*pode ser usada a mistura recentemente preparada dos dois corantes.

Montagem dos cortes

- Meios de montagem

Provisório: glicerina

Semipermanente: gelatina glicerinada

Permanente ou definitivo: bálsamo do Canadá natural ou sintético

Ver: https://www.youtube.com/watch?v=UEyLIC1nU5k

micrótomo manual 02

http://www.vidrariadelaboratorio.com.br/microtomo/