Purificação De Carboidratos

Primeiramente, é necessário efetuar a extração eficiente dos polissacarídeos evitando, tanto quanto possível, reações de degradação. Os procedimentos mais comuns são as extrações aquosas a frio, a quente e/ ou alcalina, com NaOH ou KOH, ou até mesmo com auxílio de enzimas específicas. Os extratos obtidos, geralmente são constituídos por uma mistura de polissacarídeos. Precedendo a caracterização, procedimentos de purificação devem ser efetuados até que a composição monossacarídica da macromolécula em estudo se mantenha constante por, pelo menos, dois métodos diferentes. Normalmente, métodos cromatográficos e/ou químicos dão informações em relação à pureza da preparação polissacarídica. Considerando-se a pureza do material o primeiro procedimento químico para conhecer a composição de uma fração rica em carboidrato é fragmentá-la, visando obter os resíduos monossacarídicos que a constitui. Esta fragmentação pode ser realizada através de hidrólises enzimática ou ácida. Estabelecidas às condições ideais de hidrólise, a identificação dos monômeros passa a ser a etapa seguinte da análise.

Os métodos cromatográficos são os mais utilizados e a cromatografia líquida de alta pressão em troca aniônica (HPAEC) tem sido, juntamente com a cromatografia gasosa, os de preferência.

O tipo de ligação glicosídica geralmente é determinado após a análise dos acetatos de alditóis parcialmente metilados por cromatografia gasosa e espectrometria de massa (CG/EM) e a configuração anomérica dos monossacarídeos que constituem a macromolécula por e RMN de 13C

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