Relátorio sobre praticas laboratoriais

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
CAMPUS UNIVERSITÁRIO DE BELÉM
INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIÓLOGICAS
FACULDADE DE BIOTECNOLOGIA

2º Relatório
Isolamento e Cultura Primária.

Prof. Dr. Moysés Miranda
Amanda Manuelly da Silva Oliveira
Biotecnologia/2014

Belém – PA
2016

1. INRODUÇÃO

As Culturas de células primarias são feitas a partir do células tiradas diretamente do tecido oriundas de degradação enzimática, mecânica ou química, nessa pratica nós utilizamos o método mecânico, as células são cultivadas numa camada aderente, num substrato sólido ou em suspensão em meio de cultura, em nosso caso as placas de petri são para a adesão do explante.
As células que sobrevivem ao processo de degradação, e aderem a placa de cultura ou a garrafa de cultura, formam as culturas primarias.

Essas células possuem as características dos tecidos que se originam, e as que mantem as características originais tem um tempo de vida mais curto.

Em geral a cultura primaria á medida que é repicada, ou passa pelo processo de passagem, as células que melhor de adaptam predominam na placa ou garrafa de cultivo, entretanto por conta do processo de degradação outras células entram em estado de senescência e morrem assim não possuem uma taxa normal de proliferação.

Todo o procedimento deve ser realizado dentro do fluxo laminar e com todo o cuidado para não haver contaminação.

1. OBJETIVO
   

Essa aula pratica tem como objetivo de mostrar na como se realiza a preparação e o isolamento de células a partir de um tecido para fazer o cultivo celular.

1. METODOLOGIA
   

Antes de começar a nosso isolamento e cultura de células primaria é necessário traçar nosso objetivo, ter o caderno de protocolo, preparar todo o nosso matéria com um ou dois dias de antecedência, separar todo o material, a amostra e os reagentes que irão ser utilizados.

Para começar utilizaremos os seguintes materiais:

Meio de Cultivo: DMEM

O Meio Dulbecco MEM é uma mistura de sais enriquecido com aminoácidos, nutrientes e outros componentes essenciais para o crescimento celular, a cor vermelha é dada pelo fenol para indicação do pH.

Suplemento para o meio: Soro Fetal Bovino

É um suplemento para o meio de cultura celular, ele contém uma grande quantidade de componentes como fatores de crescimento, vitaminas, aminoácidos, ácidos graxos e todos esses componentes tem finalidade de fazer com que as células cresçam.

Antibióticos: Estreptomicina, Gentamicina e Anfotamicina (Fungicida)

Os antibióticos servem para a preservação da cultura.
Estreptomicina: é um composto de aminoácidos concentrado por ligações glicosídicas, é um antibiótico por assim dizer aminoglicosídeo e age predominantemente nas bactérias gram-negativas.

Gentamicina: Também faz parte dos antibióticos aminoglicosídeos porem ele tem sua ação além das bactérias gram-negativas, ele atua também sobre as staphylococcus aureus e outras bactérias gram-positivas.

Anfotamicina: É um antifúngico da classe dos polienos.

PBS: Tampão fosfato-salino ou phosphate buffered saline abreviando fica PBS, é uma solução salina contendo fosfato de sódio e cloreto de sódio em alguns casos também pode conter cloreto de potássio e fosfato de potássio e te como finalidade manter o valor do pH constante.

Álcool.

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Imagem com os reagentes, e meios.

Materiais: Ponteiras, Micro Pipetas, Pipetas pasteur, Placas de Petri, bisturi, e descarte.

1º - Buscar o Material.

A amostra utilizada foi uma orelha de boi, o material foi coletado em um abatedouro, lá a orelha foi lavada:

1º Com água

2º Álcool

3º Com PSB com 4ml de antibiótico.

A orelha foi transportada com PSB suplementado de antibiótico.

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Imagem com a orelha do boi.

2º - Limpar e Cortar um pedaço da orelha.

Dentro do fluxo é retirado os pelos da orelha, em seguida joga-se álcool durante 30 segundos para exterminar qualquer contaminante possível.

Depois lavar com PBS sem o antibiótico, em seguida retirar o pelo da pele da parte de dentro da orelha.

Corta-se a orelha de forma que ira ser utilizada apenas a parte do meio em seguida se retira toda a gordura e são cortadas as extremidades.

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Imagem mostra a retirada o pelo restante na pele.

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Imagem mostra a retirada da gordura

3º Explante.

Nessa parte nós cortamos a orelha em pedaços bem pequenininhos e colocamos um por um na placa, quanto menor for o tamanho do explante com mais facilidade a célula sairá da sua matriz e se ramificará na placa.