Doseamento açucar redutor

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FUNDAÇÃO EDUCACIONAL SERRA DOS ÓRGÃOS - FESO

CENTRO UNIVERSITÁRIO SERRA DOS ÓRGÃOS – UNIFESO

CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – CCS

CURSO DE GRADUAÇÃO EM FARMÁCIA

BIOQUÍMICA I

RELATÓRIO DE PESQUISA:

Dosagem de açúcar redutor e Determinação da Curva Padrão

Acadêmicos: Graciana Maia de Lima

                       Márcia Cristina Pinheiro Fonseca

                Olavo Neto

Teresópolis

2/2009

I – INTRODUÇÃO

Alguns açúcares têm a capacidade de doar par de elétrons do grupo carbonila. Esses açúcares são denominados açúcares redutores, pois são capazes de reduzir agentes oxidantes. Alguns exemplos são a glicose, maltose, entre outros. Os agentes redutores são doadores de elétrons (exemplos: glicose, maltose, entre outros) e os oxidantes são receptores de elétrons (exemplo: ácido 3,5-dinitrosalicílico - DNS).

A maioria das soluções de biomoléculas não é capaz de absorver luz na faixa do visível e, por isso, para que sejam utilizados métodos colorimétricos será necessária a utilização de artifícios que convertam soluções incolores em soluções coloridas.

Entre os vários métodos para determinação quantitativa de glicídios, baseado nas sua propriedades redutoras, está o método do ácido 3-5-dinitrosalicílico (DNS). As aldoses e cetoses com hidroxilas heterosídicas livres, são capazes de reduzir soluções alcalinas de determinados compostos, como é o caso deste método, onde um mol de açúcar vai reagir com um mol de ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS), que é amarelo.  O ácido 3,5-dinitrossalicílico (DNS) é reduzido para 3-amino ,5-nitrosalicílico, ficando com a cor alaranjada, sob condições alcalinas:

oxidação

 Grupo aldeído ----------------> Grupo carboxila

 redução

 Ácido 3,5-dinitrossalicílico -----------------> 3-amino ,5-nitrossalicílico

        A determinação da concentração de açúcar redutor presente em soluções, pode ser realizada pela intensidade da luz absorvida a 540 nm, em um espectrofotômetro, pois como são biomoléculas, absorvem luz em comprimentos de onda (λ) característicos e, por este motivo, o aparelho é eficaz para fazer medições da capacidade de absorção de luz. A capacidade que as substâncias químicas têm de absorverem luz em determinados comprimentos de onda pode ser utilizada para a sua determinação quantitativa e qualitativa, uma vez que o espectro de absorção é característico para uma determinada substância e a quantidade de absorção é dependente da concentração do composto.

Quando uma faixa de luz monocromática atravessa uma solução colorida, a quantidade de luz absorvida é diretamente proporcional à concentração da solução colorida e à espessura da camada atravessada.

A Lei de Lambert-Beer  fala que a absorbância é diretamente proporcional à concentração da espécie química absorvente, sendo constantes o comprimento de onda, a espessura atravessada pelo feixe luminoso e demais fatores, demonstrando então: log I0/I = ε.c.l

A expressão log I0/I é chamada de absorbância podendo ser designada com a letra A, ficando então: A = ε.c.l

O coeficiente de extinção molar ε é característico de cada substância sobre uma série de condições definidas tais como comprimento de onda, solvente e temperatura.

Através dessas condições apresentadas pode-se construir um gráfico de absorbância (curva padrão) em função da concentração da proteína analisada.

II - OBJETIVOS

 Dosar açúcares redutores por espectrofotometria na faixa do visível, utilizando uma solução de glicose de concentração 5µmol/ml e elaboração de uma curva padrão.

III – PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

Reagentes:

- Solução padrão de glicose

- Solução de ácido 3,5-Dinitrosalicilato (DNS)

- Água destilada

Materiais:

- 06 tubos de ensaios médios

- ponteira

- 02 béchers de 50 ml

- Pipetas automáticas de (200μL) e de (50μL)

- Vórtex

- Banho a 100°C

- Cubeta quadrada

- Bécher para descarte

- Balança analítica

- Espectrofotômetro

Procedimentos

        Adicionou-se em 05 tubos a solução padrão glicose (cada um deles recebendo uma quantidade diferente), a água (para cada tubo quantidades diferentes), e por último 1 mL da solução de ácido 3,5-Dinitrosalicilato (DNS). No tubo branco não foi adicionada a solução de glicose, apenas 1 mL de água e 1 mL da solução de ácido 3,5-Dinitrosalicilato (DNS).

        Em seguida, cada um dos tubos foi homogeneizado no vórtex, por 10 segundos e levados para aquecimento a 100°C por 5 minutos e depois resfriados.

Completou-se o volume de cada tubo a 15 mL com água destilada e homogeneizou-se novamente cada um no vórtex, por 10 segundos. Usando o branco da reação, determinou-se as absorvâncias a 540 nm (A mistura de cada tubo foi colocada na cubeta e a cada leitura, descartada e lavada a cubeta, para evitar a contaminação das amostras).

Procedeu-se então, o cálculo da concentração de glicose contida em cada tubo, plotando-se em gráfico, as leituras de absorbância x concentração obtidas, daí determinou-se o coeficiente angular (ΔAbs/Δ[ ]) e o fator ([ ]/ΔAbs) da reta obtida.