Açao Enzimatica Da Bromelaina

AÇAO ENZIMÁTICA DA BROMELAÍNA

INTRODUÇÃO

Bromelina é uma enzima de origem vegetal obtida de diversas espécies

da família Bromeliaceae, presente na casca, no talo e no fruto do abacaxi. O Brasil

encontra-se entre um dos maiores produtores mundiais de abacaxi, ocupando o

terceiro lugar no ranking mundial. O desenvolvimento de novas técnicas de extração e purificação da bromelina vem sendo bem explorado, entretanto, tornou-se

necessário um estudo de estabilidade desta protease, proporção pela qual a

bromelina conserva sua conformação estrutural ou sua atividade quando sujeita à

estocagem, isolamento e purificação ou várias outras manipulações físicas ou

químicas, incluindo autodigestão, outras enzimas proteolíticas e aquecimento.

Tornou-se de fundamental importância saber em que condições a

bromelina se mantém estável, ou seja, ativa e por qual período de tempo, já que a

meta mais significante da enzimologia aplicada é obter compostos úteis para

biocatálise. Este trabalho apresenta um estudo das condições de pH e

temperatura nas quais a Bromelina P.A em solução aquosa em concentração

próxima ao do suco extraído da polpa da fruta, mantém-se ativa, ou seja, não

desnaturada. A atividade enzimática da bromelina em solução foi medida através

da hidrólise da caseína e a condição de pH e temperatura mais próxima da ideal

foi determinada.

As enzimas são utilizadas como biocatalizadores em química orgânica como uma alternativa aos processos químicos clássicos por apresentarem inúmeras vantagens. Dentre estas se

destacam elevada velocidade de reação; utilização de condições brandas; compatibilidade com substratos sintéticos; em alguns casos podem catalisar as reações nos dois sentidos e podem, ainda, apresentar alguma seletividade quanto ao tipo de reação que catalisam. Já em medicamentos, a grande eficiência das enzimas aliada à sua especificidade, tornam-nas, a princípio, agentes de grande potencial para uso terapêutico. Entretanto, deve-se levar em conta os aspectos como especificidade, pH ótimo, temperatura de estabilidade, presença de

ativadores ou inibidores, preço e viabilidade. Para aplicações terapêuticas, principalmente para uso interno, a enzima precisa ter um elenco de características apropriadas tais como: alta atividade e estabilidade em pH fisiológico, baixa resposta imunológica e alta afinidade pelo substrato.

Bromelina é o nome genérico dado às enzimas proteolíticas encontradas no abacaxi, bem como em outras espécies da família Bromeliaceae. Conforme será discutido na revisão bibliográfica que se segue, esta enzima presente no abacaxi mostrou-se um objeto de análise relevante e viável ao estudo da estabilidade enzimática, já que, segundo BALDINI et. al. (1993), o abacaxi é o único fruto que possui concentrações relativamente altas no estado maduro, embora ligeiramente decrescentes. Estudiosos deste tema têm revelado que a

enzima não está presente nos primeiros estágios de desenvolvimento do fruto, entretanto, seu nível aumenta rapidamente, mantendo-se elevado até o amadurecimento, diferente do que ocorre, por exemplo, com a proteína presente no mamão, a papaína, a qual somente é encontrada em altos níveis quando o fruto ainda está verde.

OBJETIVO

Avaliar a atividade enzimática da Bromelina sobre o colágeno e o efeito da desnaturação protéica por temperatura.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

MATERIAIS

- Tubos de ensaio

- Béqueres

- Água destilada

- Suco do abacaxi

-Banho-Maria

-Estufa

-Termômetro

-Peneira

-Pistilo

-Almofariz

MÉTODO

1) Primeiramente, extraiu-se aproximadamente 15ml de suco de abacaxi da seguinte forma: -Cortou-se uma fatia de abacaxi em pedaços pequenos; com o auxilio de um almofariz e pistilo, macerou-se o abacaxi. E por fim identificou-se o béquer com “Suco de abacaxi sem ferver. Mediu-se o volume de suco

2) Em um tubo de ensaio colocou-se 6ml de suco de abacaxi e adicionou-se água fervente por 10 min. O mesmo foi identificado como “Suco de abacaxi fervido”

3) O restante do suco foi reservado em um béquer.

4) Preparou-se três tubos de ensaio (1 a 3) e, para cada um deles, foi adicionado 0,1 g de gelatina.

5) Agitou-se

6) No primeiro tubo adicionou-se 6ml de suco de abacaxi sem ferver; no segundo 6ml de suco de abacaxi fervido; no terceiro 6ml de água destilada.

7) Incubou-se