Dosagem Proteinas

DOSAGEM BIOQUÍMICA: PROTEÍNAS TOTAIS

Princípio do Teste

A proteína presente na amostra reage com íons cobre em meio alcalino (reagente de BIURETO), originando um complexo colorido que é quantificado por espectrofotometria.

AMOSTRA

Amostras utilizadas

Soro. Plasma somente se for com heparina. Anticoagulantes quelantes interferem na reação.

Estabilidade e armazenamento da amostra

O analito é estável por 8 dias a 2-8 ºC.

Separar o soro ou plasma dos elementos celulares no prazo máximo de 1 hora.

EQUIPAMENTOS e MATERIAIS UTILIZADOS

Procedimento Técnico Manual

• Espectrofotômetro;

• Pipetas automáticas (20 e 1000 µL);

• Cronômetro;

• Centrífuga;

• Grades para tubos;

• Tubos de hemólise (12x75mm)

PROCEDIMENTO TÉCNICO

1- Identificar tubos de ensaio com "Branco", "Teste" e "Padrão" e proceder da seguinte forma:

Tubos Branco Teste (paciente) Padrão

H2O 40 mL ¾¾ ¾¾

Amostra (soro/plasma) ¾¾ 40 mL ¾¾

Padrão ¾¾ ¾¾ 40 mL

Reagente de Cor 2000 mL 2000 mL 2000 mL

2- Pipetar por último o reagente de cor em todos os tubos e homogeneizar vigorosamente;

3- Deixar os tubos em repouso na temperatura ambiente por 10 min;

4- Fazer a leitura no Espectrofotômetro das absorbâncias, usando o Branco para zerar o aparelho;

5- Em seguida ler as ABSs dos padrões (em duplicata) e das amostras dos pacientes (em duplicata), usando 545 nm;

6- Calcular o fator de calibração através da fórmula;

F = [ ] padrão

ABS padrão

7- Em seguida usando o F, calcular a proteína dos pacientes.

[ ] Proteína = F x ABS (soro)

(paciente)

Observações:

I – A [ ] padrão de proteína é de ..... g/dL;