A Contagem de Coliformes em Alimentos

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PROCEDIMENTO TÉCNICO

Assunto Contagem de Coliformes em Alimentos

Código 01

Revisão 00

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• [pic 5]1º Passo preparar os meios de cultura:

Água Peptonada 0,1%

• Em um erlenmeyer com 225ml de água destilada, adicione 45 ml dividido em 5 tubos de ensaio (9ml em cada).
• Pesar 5,6g de água peptonada 0,1% em uma balança analítica e dissolver em 280ml de água destilada;
• Distribuir 9ml de solução para 5 tubos de ensaio e esterilizar a 121º C (1 Kg/cm2 de pressão) em autoclave durante 15 minutos.

EMB

• Pesar 3g de Caldo EMB em uma balança analítica e dissolver em 80ml de água destilada;
• Colocar em um erlenmeyer a solução e depois colocar em um autoclave;
• esterilizar a 121º C (1 Kg/cm2 de pressão) em autoclave durante 15 minutos;
• Depois passar para 5 placas de petri.

MCK

• Pesar 4,12g de Caldo MCK em uma balança analítica e dissolver em 80ml de água destilada;
• Colocar em um erlenmeyer a solução e depois colocar em um autoclave;
• esterilizar a 121º C (1 Kg/cm2 de pressão) em autoclave durante 15 minutos;
• Depois passar para 5 placas de petri.

Caldo Verde Brilhante

• Pesar 1,6g de Caldo Verde brilhante em uma balança analítica e dissolver em 40ml de água destilada;
• Com uma pipeta, colocar 10ml de Caldo Verde brilhante em 3 tubos de ensaio;
• esterilizar a 121º C (1 Kg/cm2 de pressão) em autoclave durante 15 minutos;
• Observar o valor em gramas do reagente para o volume adequado, preparar o meio de cultura referente ao volume de 40ml.

Caldo EC

• Pesar 1,48g de Caldo EC em uma balança analítica e dissolver em 40ml de água destilada;
• Com uma pipeta, colocar 10ml de Caldo EC em 3 tubos de ensaio;
• esterilizar a 121º C (1 Kg/cm2 de pressão) em autoclave durante 15 minutos;
• Observar o valor em gramas do reagente para o volume adequado, preparar o meio de cultura referente ao volume de 40ml.

• 2º Passo: Pesar a amostra de alimento e macerá-lo;
• Adicionar o alimento à solução de água peptonada previamente preparada na proporção de 25g para cada 225 ml e agitar por 15 minutos;
• Identificar as placas de Pétri e os tubos autoclavados. Importante conter data, diluição e nome do meio de cultura;
• Abrir as ponteiras autoclavadas;
• Para diluição seriada:

• Utilizar uma micropipeta para pipetar 1 ml da solução 1 e passar para a solução 2 e assim sucessivamente;
• Descartar 1 ml da última diluição;
• Pipetar 1 ml de cada solução em suas respectivas placas de Pétri (vide identificação);

• Técnica “Pour Plate”:

• Adicionar do meio de cultura EMB às placas contendo as diluições, realizando movimentos em “8” contra a superfície para espalhar esse meio;
• Deixar as placas semiabertas para se solidificarem;
• Pipetar novamente 1 ml cada diluição em suas respectivas placas vazias;
• Adicionar do meio de cultura MCK em cada uma dessas novas placas pipetadas com a diluição, realizando movimentos em “8” contra a superfície para espalhar igualmente;
• Deixar solidificar.

• Vedar cada placa com fita crepe;
• Incubar na estufa bacteriológica 36 +/- 2ºC por 24 horas.

1. Observações importantes

• Temperatura de amostra deve ser guardada em 2-8 Cº;
• Conferir data de coleta e data de validade do produto;
• Realizar limpeza da cabine de fluxo laminar com álcool 70% e colocar todo material que irá ser utilizado, passar álcool 70% em todos os utensílios antes de inserir na cabine. Com a cabine de fluxo laminar limpa e com todos materiais dentro, exceto o material biológico, ligar a lâmpada germicida por 15 min CUIDADO PARA NÃO SE EXPOR A LUZ;
• Utilização de EPI;

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* Este Procedimento Técnico revoga todas as orientações anteriores sobre o assunto e entra em vigor a partir de 26/04/2021.
Analisado criticamente por: Wdson Martins Matheus Victor Ana Carolina Flavia dos Santos Paula de Pádua [pic 9] Técnicos em Química	Data: 26 de abril de 2021	Aprovado por: Lorena Freitas Instrutora de Química	Data:

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