Os Meios de cultura seletivos para microrganismos gram-negativos

1. Meios de cultura seletivos para microrganismos gram-negativos:

1. Ágar MacConkey – contém sais biliares que inibem o crescimento de microrganismos gram+ e verifica a fermentação ou não da lactose.
2. EMB (Eosin Methylene Blue) – é um meio para diferenciação ligeiramente seletivo utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram-negativos e verificação da fermentação ou não da lactose e sacarose.
3. Ágar Hektoen enteric (HE) – Os sais biliares e os corantes azul de bromotimol e fucsina ácida inibem o crescimento da maioria dos microrganismos Gram-positivos.
4. ÁGAR SALMONELLA-SHIGELLA – possui sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio que inibem microrganismos Gram positivos. Utilizado para selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella.
5. CALDO TETRATIONATO – Os sais de bile contidos no meio de tetrationato inibem microrganismos Gram positivos e a adição da solução de iodo inibe a flora intestinal normal de espécies fecais. É um meio de enriquecimento para Salmonella spp.

1. Meios de cultura seletivos para microrganismos gram-positivos:

1. Ágar Sal Manitol - Devido à alta concentração de NaCl há inibição de crescimento de bastonetes Gram negativos.

1. Técnicas de identificação

1. ÁGAR CITRATO SIMMONS – Verifica a capacidade da bactéria de utilizar o citrato de sódio como única fonte de carbono, juntamente com sais de amônia, alcalinizando o meio. Diferencia gêneros e espécies de enterobactérias e não fermentadores.
2. ÁGAR BÍLIS-ESCULINA – A prova de Bile-Esculina é baseada na capacidade de algumas bactérias hidrolisarem esculina em presença de bílis. A esculina é um derivado glicosídico da cumarina. As duas moléculas do composto estão unidas por uma ligação éster através do oxigênio. A esculina é incorporada em um meio contendo 4% de sais biliares. As bactérias Bile-Esculina POSITIVAS, são capazes de crescer em presença de sais biliares. A hidrólise da esculina no meio resulta na formação de glicose e esculetina. A esculetina reage com íons férricos (fornecidos pelo composto inorgânico do meio - o citrato férrico), formando um complexo negro. Separa os Streptococcus Bile-Esculina positiva dos Bile-Esculina negativa. Identifica os Enterococcus spp. que são Bile-Esculina positiva. Identifica bacilos Gram negativos não fermentadores e enterobactérias, usar o meio sem bílis (vide prova de esculina).
3. PROVA DE CATALASE – A catalase é uma enzima que decompõe o peróxido de hidrogênio (H2O2) em água e oxigênio. Para Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Listeria, Corynebacterium, Micrococcus, Bacillus, Moraxella catarrhalis.
4. PROVA DE COAGULASE – Verifica a capacidade de microrganismos reagirem com o plasma e formarem um coágulo, uma vez que a coagulase é uma proteína com atividade similar à protombrina, capaz de converter o fibrinogênio em fibrina, que resulta na formação de um coágulo visível. Pode ser encontrada em duas formas que possuem diferentes propriedades: coagulase conjugada e coagulase livre.
5. PROVA DE GELATINASE – Determina a habilidade do microrganismo de produzir enzimas proteolíticas (gelatinases) que liquefaz/hidrolisa gelatina. Identificar e classificar bactérias fermentadoras, não fermentadoras e bacilos Gram positivos esporulados
6. PROVA DE LECITINASE – Cepas produtoras de lecitinase produzem zona opaca ao redor do inóculo. Diferenciação de espécies de Bacillus e Clostridium.
7. PROVA DE OXIDASE – O teste de oxidase é baseado na produção intracelular da enzima oxidase pela bactéria. Ajuda caracterizar espécies de Neisseria, distingue não fermentadores (oxidase positiva) de enterobactérias (oxidase negativa). Diferencia algumas bactérias fermentadoras oxidase positiva entre elas Plesiomonas shigelloides, Aeromonas spp. e Vibrio spp.
8. FERMENTAÇÃO DE CARBOIDRATOS – A fermentação de carboidratos é amplamente utilizada para a diferenciação de gêneros e identificação de espécies bacterianas. A prova consiste em verificar a capacidade do microrganismo fermentar ou não um determinado carboidrato, permitindo assim verificar as suas características que auxiliaram na identificação. Identifica e separa espécies de Enterococcus spp., Streptococcus spp. e Staphylococcus coagulase negativa.
9. PROVA DE TOLERÂNCIA AO NaCl 6,5% – A tolerância ao NaCl a 6,5% é uma prova utilizada para verificar a capacidade de alguns microrganismos crescerem em presença do sal. Meio base utilizado é o BHI caldo, que é um meio nutritivo de uso geral, empregado para o cultivo de muitas bactérias. Este meio normalmente contém 0,5 % de NaCl e aumenta-se a concentração para 6,5 %, tornando um meio semi-seletivo para o desenvolvimento de alguns microrganismos. Separa Enterococcus spp., que são NaCl 6,5 % positivo dos demais Streptococcus spp., que são NaCl 6,5% negativos. Na identificação de bacilos Gram negativos não fermentadores.

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Referências

ANVISA. Descrição dos Meios de Cultura Empregados nos Exames Microbiológicos. Disponível em: . Acesso em: 22 de maio de 2017.

CRUZ, I. V. Meios seletivo e diferencial. Disponível em: . Acesso em: 23 Maio de 2017.

INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO – MEIOS EM PLACAS PRONTOS A USAR. Disponível em: . Acesso em: 24 Mai. 2017.

NICÉSIO, R. G. Conheça os principais meios de cultura. Disponível em: . Acesso em: 23 Mai. 2017.

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