RELATÓRIO DA PRÁTICA DE GENÉTICA

UNIVERSIDADE ESTADUAL DO MARANHÃO - UEMA

CENTRO DE ESTUDOS SUPERIORES DE CAXIAS - CESC

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA E BIOLOGIA – QUIBIO

CURSO DE CIÊNCIAS BIÓLOGICAS – LICENCIATURA

DISCIPLINA: GENÉTICA

DOCENTE: MARIA CLAUDENE BARROS

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ELETROFORESE EM GEL DE AGAROSE

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

CAXIAS-MA

2022

ANDREINA KAUANY BRITO DOS SANTOS

JAYNARA SILVA DOS SANTOS [pic 1]

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ELETROFORESE EM GEL DE AGAROSE

 

 

Relatório apresentado à professora Claudene Barros como requisito parcial para a obtenção de nota na disciplina Genética do curso de Ciências Biológicas – Licenciatura. dno Centro de Estudos Superiores de Caxias-CESC

 

   

 

CAXIAS – MA

2022[pic 2]

 INTRODUÇÃO

A eletroforese é uma técnica bioquímica versátil, relativamente simples, rápida e de grande poder informativo. Inicialmente proposta por Arne Teselius (1937), a eletroforese era técnica empregada para visualização de proteínas com suas diferenças de comprimento de fragmentos de aminoácidos e cargas elétricas. A técnica apresenta basicamente um sistema de suporte (gel de agarose, por exemplo), um tampão no qual está imerso o gel e os eletrodos nas extremidades da cuba onde estão contidos o tampão e o gel.

Atualmente, o uso desta técnica é comum também para estudos com ácidos nucléicos (Brown 1998; Farah 2000). Na visualização de material genético (ácido desoxirribonucléico e ribonucléico, DNA e RNA), utiliza-se comumente gel de agarose por apresentar porosidade irregular, funcionando assim como uma malha que separa o DNA, por diferença de tamanho, dos fragmentos menores que chegam mais rápido ao final da corrida eletroforética. O DNA apresenta-se com carga negativa e, devido a esta característica pode-se conduzi-lo de um pólo com carga negativa para um pólo com carga positiva.

        Sob influência de um campo elétrico, moléculas carregadas e partículas migram em direção ao pólo oposto. A carga e a massa das moléculas fazem com que elas migrem em velocidades diferentes e, portanto, propiciam a separação destas (Westermeier, 2005). Como os ácidos nucléicos (DNA e RNA) possuem carga elétrica negativa (devido ao grupamento fosfato) eles sempre migrarão em direção ao pólo positivo. Então, o fator determinante da taxa de migração será a massa da molécula (quando se fala em ácidos nucléicos, a massa é diretamente proporcional ao tamanho da molécula). O presente estudo teve como objetivo analisar o DNA de tecido muscular por meio da técnica de eletroforese em gel de agarose.

 

 

 

 

MATERIAL E MÉTODOS

Materiais	Reagentes
- Tubo de microcentrífuga                                   - Micropipeta                                                           - Ponteiras                                   - Suporte para gel e pente - Cuba de eletroforese - Transluminador - Luvas - Frasco Erlenmeyer - Brilliant green plus - Forno microondas - Vortex - Centrífuga - Shak - Estufa	- Solução salina EDTA: Cloreto de Sódio 3M e EDTA (ácido etilenodiaminotetraacético) 0,1M pH 8.0. - Nuclei Lysis Solution - Proteinase K - RNAse - Protein Precipitation - Álcool Isopropílico

A metodologia realizada no laboratório para a análise de DNA de tecido muscular em gel de agarose consistiu montagem do sistema de corrida de gel de agarose, onde colocou-se o   pente   com   a   quantidade   de   amostras correspondentes que as analisadas. Logo após a agarose foi misturada junto com 50mL de tampão de corrida TBE 1X (50ml de TBE 10X + 450 ml de H2O destilada); A agarose foi derretida durante 1 minuto aproximadamente no micro-ondas e brilliant green plus foi adicionado para uma concentração final de 0,5µg/mL ao gel.  Após a solidificação do gel no suporte foram retirados os espaçadores e o pente e emergiu-se o gel no tampão da cuba (1XTBE). Foi aplicado cerca de 3 ul de cada amostra misturados com 3 ul de corante (tampão de aplicação “Blue juice). As amostras de tecido muscular foram colocadas delicadamente nos poços e ao lado o marcador de massa molecular. Por fim o gel foi corrido a 30 V na fonte (amperagem < 50 mA) e deixado correr por cerca de 30 minutos e observado sobre a luz ultravioleta. Todo procedimento foi realizado com auxílio de luvas.