Relatorio de microbiologia

             

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Bacharelado em Engenharia Ambiental - 6° Período

Disciplina: Microbiologia

Enumeração dos microrganismos heterotróficos no solo pela Técnica Spread Plate

  

 Equipe:

Alessandra Rangel

Laureana Pelegrini

Raiane Machado

Lívia Pita

Laíne Hespanhol

CAMPOS DOS GOYTACAZES/RJ  

2016

Sumário

1.        Introdução        3

2.        Objetivos        4

3.        Metodologia        4

3.1        Materiais e reagentes        4

3.2        Métodos        5

4.        Análise e conclusão        5

4.1        Resultados        5

4.2        Discussão        6

4.3        Conclusão        6

5.        Referências        6

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1. Introdução

O solo contém uma grande variedade de microrganismos, incluindo bactérias, fungos, protozoários, algas, vírus e leveduras. Os microrganismos na natureza normalmente existem em culturas mistas, com uma vasta diversidade com muitas espécies diferentes ocupando o mesmo ambiente.

Ao determinar as características de um microrganismo, ele deve estar em cultura pura, ou seja, em que todas as células na população são idênticas no sentido de que elas se originaram de uma mesma célula parental. Em laboratório, os microrganismos são cultivados ou desenvolvidos em material nutriente denominado meio de cultura.

 O isolamento de fungos pode ser feito diretamente a partir de algum substrato ou de um compartimento ambiental (ar, água, solo), utilizando vidraria (tubos de ensaio, placas de petri) e instrumentos (estiletes, pinças, agulhas) esterilizados, com a manipulação em uma zona de segurança próximo a uma chama ou em uma câmara de fluxo laminar, para que ocorra o isolamento dos fungos; para bactérias é necessário oferecer condições propícias para o desenvolvimento dos mesmos.

Para o isolamento de microrganismos do solo, o procedimento é organizado em cinco etapas: As diluições seriadas para o isolamento do solo; Separação de Fungos e bactérias e leveduras pela diferença de meios de cultura; A contagem de microrganismos; isolamento da cultura pura. O solo é um ecossistema complexo, dinâmico e diversificado.  

Práticas laboratoriais são utilizadas comumente para contagem de microrganismos presentes em uma determinada amostra. Dentre essas práticas, destacamos as técnicas de espalhamento em superfície (spread-plate) e plaqueamento em profundidade (pour-plate). A primeira técnica consiste em sucessivas diluições da amostra, e que em cada diluição é espalhada em duas placas de Petri contendo meio de cultura 0,1 ml da amostra. Também conhecido como método das diluições seriadas, este método serve tanto para o isolamento quanto para contagem de microorganismos. Após o plaqueamento e incubação, por tempo e temperatura adequados, as células ou pequenos agrupamentos vão crescer isoladamente, dando origem a colônias que serão contadas na diluição apropriada e, portanto, chamadas de unidades formadoras de colônia (UFC).

Já a segunda técnica tem como meio de cultura o ágar fundido que permite o crescimento não só ao longo da superfície como no interior do ágar. São adicionados 1,0 ml da amostra no fundo de uma placa estéril e em seguida adicionado o ágar, ainda líquido. A homogeneização do inoculo é feita com movimentos suaves em forma de “8” sobre a bancada. É preciso garantir que o meio não solidifique antes da homogeneização nem fique muito quente para não matar as células microbianas.

1. Objetivos

• Enumerar microrganismos em diferentes tipos de solo utilizando a técnica Spread Plate;
• Avaliar a qualidade do solo.

1. Metodologia

1. Materiais e reagentes

• 01 Erlenmeyer estéril contendo 10 g de solo de horta;
• 01 Proveta graduada estéril de 10 mL;
• 06 Tubos de ensaio com tampa;
• 06 Placas de Petri contendo Ágar Para Contagem (APC);
• 07 Pipetas graduadas estéreis (06 de 10 mL e 01 de 1Ml);
• 01 Alça de Drigalsky;
• Solução de Cloreto de Sódio (NaCl) 0,9 %m/v;
• Pêra de sucção;
• Estufa (marca Biopar);
• Contador de Colônias (marca Phoenix e modelo CP-600);
• Estante de madeira para tubos;
• Fita Crepe;
• Caneta;
• Bico de Bunsen;
• Fósforo.

1. Métodos

Foi realizado uma amostragem de solo, logo após esse solo foi devidamente peneirado e aproximadamente 10g foi depositado em um Bequer com 90ml de solução (solução salina 0,9%). Em seguida, foram feitas diluições dessa solução de solo (1 ml da amostra em 9 ml de líquido de diluição, depois 1 ml da amostra diluída em outro tubo contendo 9 ml de líquido de diluição, assim sucessivamente).