RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA DOSAGEM DE FOSFATASE ALCALINA NO SORO

UNIVERSIDADE DO ESTADO DA BAHIA[pic 1]

LORENA RODRIGUES

QUESIA CARVALHO

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA

DOSAGEM DE FOSFATASE ALCALINA NO SORO

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                     

             

SALVADOR- BA

2017

LORENA RODRIGUES

QUESIA CARVALHO

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA

DOSAGEM DE FOSFATASE ALCALINA NO SORO

Relatório de aula prática apresentado como requisito parcial para aprovação na disciplina de Bioquímica do Curso de Farmácia da Universidade do Estado da Bahia, Campus I, Departamento de Ciências da Vida, orientado pela professora Polyanna Carôzo De Oliveira.

SALVADOR- BA

2017

INTRODUÇÃO

A fosfatase alcalina é uma hidrolase que cliva fosfato de diferentes moléculas (carboidratos, proteínas e lipídios) através da reação de desfosforilação. Sendo alcalina, é sabido que sua atividade ótima dar-se em meios de pH básico/alcalino (9-10).  Também é chamada de éster monofosfatado (éster + metoxila com variação apenas no fosfato).

“As fosfatases foram consideradas como enzimas promíscuas, exibindo pouca especificidade intrínseca de substrato. A fosfatase alcalina é uma fosfomonoesterase não-específica usualmente ligada à superfície externa da membrana celular. Em humanos, há quatro genes para esta enzima: intestinal, placentária, células germinativas e tecido não-específica (Whyte, 1994). Esta última forma é alterada por modificações pós-traducionais para diferenciar-se nas isoformas óssea, hepática e renal.” (ROSS et al., 1951).

Embora a atividade catalítica máxima seja alcançada em pH 9-10, as propriedades cinéticas no pH 7,4 são mais compatíveis com as concentrações fisiológicas do substrato A fosfatase alcalina precisa dos íons magnésio e/ou zinco como cofatores.

Cotidianamente é utilizada no diagnóstico e no acompanhamento de distúrbios hepáticos e ósseos. Nos distúrbios hepáticos, ela reflete sofrimento das células dos ductos biliares. Já os distúrbios ósseos, indica aumento da atividade de formação óssea.

Outros exames permitem identificar a origem do aumento de fosfatase alcalina. Alterações de outras enzimas hepáticas, como aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), gama-glutamil transpeptidase (gama-GT), ou de bilirrubinas sugerem doença hepática, e alterações das medidas de cálcio, fósforo e vitamina D indicam distúrbios ósseos.

Numa perspectiva mais interpretativa das dosagens destas enzimas em condições de anomalias, principalmente na elevação de AST e ALT, sugerem envolvimento predominante das células do tecido hepático (hepatócitos). Elevações maiores da fosfatase alcalina indicam obstrução do fluxo biliar. Esta ocorre fora do fígado e é provocada por cálculos biliares ou tumores que bloqueiam os canais que conduzem a bile para o intestino ou na vesícula biliar. Nesses casos, costuma haver também um aumento expressivo da bilirrubina.

OBJETIVO

O objetivo dessa prática consistiu em dosar as proteínas e analisar os resultados comparando-os com os parâmetros exigidos para o desenvolvimento das suas funções no organismo e observar a atividade da enzima catalase.

METODOLOGIA

 

DOSAGEM DE FOSFATASE ALCALINA NO SORO

Tubos	Branco	Teste	Padrão
Substrato	50µl	50µl	50µl
Tampão	0,5ml	0,5ml	0,5ml
Incubar a 37°C / 2 min
Padrão	-	-	50µl
Soro(amostra)	-	50µl	-
Incubar a 37°C / 10 min
Reagente de cor	2,0ml	2,0ml	2,0ml
Homogeneizar bem

leitura

Determinar as absorbâncias dos tubos Teste e Padrão em 590nm, zerando o aparelho com o tubo branco.

cálculo

Fosfatase alcalina (UI) =  X CP[pic 2]

Valores de Referência: Até 13 anos..........56 a 156 UI

                                       Após 13 anos........13 a 43 UI

Desta forma a quantidade de fosfatase alcalina no soro obtida na prática realizada corresponde a:

Fosfatase alcalina (UI) =  X 40 = 62,73 UI [pic 3]

RESULTADOS E DISCUSSÕES

Depois de realizados os procedimentos, os dados obtidos foram de: 0,190 para a absorbância do padrão e de 0,298 para a abs. do teste, logo, tais dados foram empregados na fórmula para determinação da dosagem, demonstrados a seguir: