Corantes E Reagentes

1. CONSERVAÇÃO DO MATERIAL BOTÂNICO

Após a coleta, separar raízes, caules e folhas. Quando necessário, estes órgãos podem ser cortados em porções menores e colocados em frascos contendo álcool etílico a 70% para sua conservação.

2. FRAGMENTAÇÃO DE AMOSTRAS

Os órgãos cilíndricos como raízes e caules são seccionados em fragmentos com cerca de 2-4 cm de comprimento da porção a ser estudada. Para as folhas, um fragmento quadrangular (0,5 cm de lado) do limbo foliar, contendo a nervura de maior calibre, em região correspondente à metade do comprimento da lâmina foliar.

3. OBTENÇÃO DOS CORTES HISTOLÓGICOS

No caso de materiais moles ou muito pequenos é necessário o uso de um suporte para facilitar o seccionamento. O fragmento da planta é colocado entre duas porções de medula do pecíolo de embaúba ou isopor. Desse fragmento são obtidos cortes histológicos transversais à mão livre, com auxílio de lâminas de barbear. Os cortes são colocados em um vidro de relógio contendo água.

4. CLARIFICAÇÃO DOS CORTES HISTOLÓGICOS

Por meio de um pincel fino, os cortes histológicos são transferidos para outro vidro de relógio contendo água sanitária a 50%, até ficarem esbranquiçados (3 a 5 min, dependendo do material). A água sanitária com uma pipeta Pasteur e os cortes são lavados cuidadosamente por 2-3 vezes com água, até a retirada total do odor da água sanitária.

5. COLORAÇÃO DOS CORTES HISTOLÓGICOS

Os cortes são transferidos com pincel para outro vidro de relógio, gotejando-se a mistura dos corantes azul de astra a 1% e safranina a 1%, na proporção de 9:1 (v/v), até cobri-los. A coloração do material foi obtida após alguns segundos até minutos (tempo variável, dependendo do material) para a coloração do material. Com auxílio do pincel, estes foram transferidos para outro vidro de relógio contendo água, sendo lavados por 2 a 3 vezes para a retirada do excesso de corante.

5.1. CORANTES E REAGENTES

Azul de astra (Azul de astra 1g, 99 ml de água detilada)

Colore a celulose.

Azul de toluidina (Azul de toluidina 0,05 g, Água destilada (até completar) 100,00 ml)

É um corante metacromático. Torna as paredes lignificadas ou suberificadas azul esverdeadas, as celulósicas são coradas de tons róseo a roxo e a lamela média avermelhada.

MICROTÉCNICA VEGETAL

Cloreto de zinco iodado (Cloreto de zinco 15,0 g, Iodeto de potássio 2,50 g , Iodo 0,45 g , Água destilada 7,00 ml)

Dá uma coloração azul-acinzentada para a celulose, amarela para alignina e preto-azulada para o amido. É um reagente, assim a coloração induzida nasestruturas é temporária.

Fucsina básica (Fucsina básica 0,1 g , Etanol 50% 100,0 ml, Cora paredes suberificadas e cutinizadas.)

Floroglucina acidificada (Floroglucinol 0,50 g , Ácido clorídrico 37% 12,25 ml ,Água destilada 12,25 ml)

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