Eletroforese De Proteinas

ELETROFORESE DE PROTEINAS

Eletroforese foi descoberta em 1937, pelo bioquímico sueco Arne Tisélius, que ganhou o Prêmio Nobel em 1948 por esse trabalho. Esse e um processo de separação de substâncias eletricamente carregadas mediante a migração diferenciada delas quando as mesmas são dissolvidas em um eletrólito, através do qual é aplicada uma corrente elétrica, no entanto quando essas substâncias são as proteínas sanguíneas, fala-se em eletroforese das proteínas.

A Eleroforese de proteínas tem sua principal importância na avaliação da gravidade de alterações clínicas hematológicas e no diagnóstico de processos inflamatórios, gamopatias e disproteinemias, sendo um dos testes mais utilizado para investigação de anormalidades protéicas presentes no sangue. Este processo é realizado com uma amostra de sangue humano, colhida numa veia e o soro é adicionado sobre um gel especial ao qual é aplicado um potencial elétrico gerado por um pólo positivo em um dos lados e outro negativo, do outro lado, o qual provoca uma migração diferenciada das diversas proteínas, de acordo com o seu peso molecular e carga elétrica, assim elas percorrem distâncias distintas, gerando diferentes bandas. As frações são quantificadas por densitometria, gerando um gráfico que exibe as bandas. A comparação delas com um gráfico padrão demonstra as anormalidades por ventura existentes. Assim temos como base a teoria de Debye-Hückel-Onsager, onde esta teoria de dissociação eletrolítica aceita o fato de as partículas carregadas moverem-se sob a influência de forças eletrostáticas para um eletrodo de carga oposta quando é aplicada uma diferença de potencial em uma solução contendo eletrólitos.

A eletroforese é a migração de uma molécula carregada sob a influência de um campo elétrico.

Entre duas placas é colocado o gel que endurece com o temperatura ambiente por agentes catalisadores, antes do gel endurecer se coloca o pente objeto que abre espaço onde será colocado posteriormente as amostras. Para que a corrente elétrica possa fluir pelo gel separando as moléculas precisa haver uma solução tampão que não permitira variações do PH, e boa condutora de eletricidade, coloca –se as amostras nos espaços feitos pelo pente com a pipeta, então liga-se o aparelho de corrente elétrica, onde se separa as moléculas, sendo que as menores passa rapidamente o gel e as maiores correm menos, depois usa-se um corante (azul de coomassie) para que se possa ver essas moléculas, aplicado ao gel, transparece as moléculas.

Figuras:

Figura 3. Eletroforese de Hemoglobina. Padrão normal - + Ap AC A2 A