Microscopia

1. Brightfield Microscópio

1.1. Introdução 
    O microscópio é um instrumento fundamental para o estudo da biologia, o que nos permite perceber detalhes de organismos e estruturas que não podem ser observados diretamente, por simples inspeção visual (5). 
    Para observar esses pequenos elementos é necessária lente aumentar. Essas lentes são conhecidos desde a época de Arquimedes, mas a ótica como uma disciplina começou a se desenvolver na monge franciscano do século XIII, Roger Bacon (6). 
A utilidade de qualquer tipo de microscópio, não só depende da sua capacidade de aumentar, mas Mais importante, a sua capacidade de resolver detalhe (1). 
F ou o estudo de material biológico possui vários tipos de microscópios, que podem ser classificados como basicamente de acordo com o tipo de fonte de luz utilizada, com o campo do microscópio óptico ., naturalmente, o mais amplamente utilizado (4) 
Este é um microscópio composto utiliza dois sistemas de lentes; o primeiro produz uma imagem ampliada do objecto, e a segunda imagem alargada formada pela primeira (5).[pic 1]

De acordo com a radiação utilizada, são classificados como: 
• Optical ou luz: 
     - Campo brilhante 
     - campo escuro 
     - Contraste de Fase 
     - Fluorescência 
     - Ultraviolet 
• Eletrônico 
    - Varrer 
    - Transmissão

1.2. Microscópio de luz. 
   Para formar uma imagem de um corte histológico utiliza a luz visível, de modo que a amostra tem de ser suficientemente fina de modo que os feixes de luz pode passar através.Métodos de coloração são também utilizados, quando necessário, para aumentar o pormenor de imagem (3). 
    O campo do microscópio é iluminada, enquanto que os objectos observados aparecem mais escuras. Geralmente com este microscópio pode chegar a 1000 aumenta, o que pode incluir algumas alterações para 2000 e 3000 os aumentos (5). 
    O olho humano não consegue distinguir objetos menores que 50 mícrons de diâmetro ou não resolvidos duas linhas separadas por menos de 100 mícrons (ou seja, são vistas como uma linha) Figura 1 (6).

1.3. Curso de luz do microscópio 
    Capacitor projeta um feixe de luz sobre as células que estão sendo examinadas sob o microscópio. Depois de atravessar as células, o feixe de luz, em forma de cone, para a lente; a lente projeta uma imagem ampliada no plano focal da ocular, que mais uma vez de largura. Finalmente imagem fornecida pelo olho pode ser percebida por a retina do olho como uma imagem localizada a 25 cm da ocular. A ampliação total é dada por um microscópio de ampliação objectivo igual a multiplicada pela ampliação da ocular (1).[pic 2]

Figura 1. Optical Microscope Facility campo branco. A lente que está mais próximo do espécime é chamado objectivo, tem uma distância focal curta e forma uma imagem real e ampliada que é o objecto do segundo sistema de lentes da ocular chamado. O condensador serve para condensar a luz sobre o modelo (6).

1.4. O sistema mecânico 
    Este sistema prende o sistema óptico e contém os elementos necessários para a iluminação e concentrar a preparação. (6). 
   
- Pie: fornece suporte e estabilidade para o sistema (6). 
  - Haste:. apoios de praia, a tubulação e os parafusos de ajuste grosso e fino (6) 
- Set Screw: causa o deslocamento do tubo ou placa na verticalmente, permitindo que o foco (6).

   [pic 3] [pic 4] 
Pé e parafuso de ajuste

- Tubo: na sua extremidade superior é o olho, e o alvo menor. É um cilindro de metal no interior do qual está pintada de preto, o que impede a reflexão da luz. Tipicamente tem um comprimento de 170 mm (6). 
- Placa: é uma plataforma horizontal sobre a qual é colocado e segurar o preparado para observar, tem um orifício central que permite a passagem de luz e um nónio permitindo deslocalização de Detalhes de d e interesse. (6)

   [pic 5]   Platina

- Substage: segurando condensador e está localizado abaixo da placa (6). 
 

1.5. O sistema óptico 
é composto por um sistema óptico de observação e um sistema óptico de iluminação; que consistem em: 
1.5.1. Sistema óptico de observação 
- Para consiste de um sistema de pequenas lentes localizados muito próximos uns dos outros, que está na extremidade distal da lente é chamado de lente frontal. Os objectivos podem ser alvos secos (nenhuma substância interposta entre a lente dianteira e preparação) ou objectivos de imersão (entre a lente dianteira e preparada uma substância é colocada cujo índice de refracção é muito semelhante à do vidro) ( . 6) 
  
- Ocular: é um tubo cilíndrico com um diafragma fixo e um centro da lente em cada extremidade, o chamado ocular superior e inferior da lente de focagem (6).[pic 6]

 [pic 7] Objectivo e Ocular

1.5.2. Sistema óptico de iluminação 
- Condensador: foca o feixe no plano do objecto que está no convés. Abaixo é a íris que regula a quantidade de luz que chega ao condensador (6). 
- Fonte de luz é uma lâmpada, que está localizado na parte inferior da unidade, não deve possuir deve ser localizado a uma fonte de luz externo (lâmpada incandescente comum) aproximadamente 30 cm. o espelho (6).

[pic 8]      Condensador e fonte de luz[pic 9]

1.6. Características metas 
• Ampliação: relação linear entre o tamanho do objecto e a sua imagem, por exemplo, 4: 1, 40: 1, 65: 1, etc (6) 
• levantador Potência: a capacidade de . imaging alvo contornos nítidos (6) 
• resolução Limite: é a menor distância que deve existir entre dois objetos para que eles possam ser exibidos separadamente. Fig 2 e 3 (6). 
• Poder de resolução: a capacidade de exibir a imagem em seus detalhes mais finos. Ele está inversamente relacionado com o limite de resolução (6) 
  
Figura 2. Comparação dos limites de resolução entre microscópio óptico, electrónico e do olho humano. As principais unidades de medida utilizadas em biologia celular são o micrômetro e nanômetros. A imagem acima mostra uma equivalência entre estas unidades, também comparando-os para o milímetro. As setas indicam os limites aproximados de resolução do olho humano, do microscópio óptico e do microscópio de electrões. (7) 
  
 [pic 10]