Relatorio solubilidade das proteinas

[pic 1]           Universidade Federal de Viçosa        [pic 2]

Campus Florestal

Ciências Biológicas

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Estudo da solubilidade das proteínas.

Ellen Galvão 2688

Gabriella Parreiras 2691

Janaína E. Borges 2695

Julian Santiago 2701

Florestal, 03 de Novembro de 2016.

Introdução:

A solubilidade das proteínas é definida como a proporção entre as diferentes interações que ocorrem entre as moléculas de proteínas e entre o solvente e essas moléculas.  Desta forma, a solubilidade de uma proteína pode ser alterada por qualquer fator que interfira neste conjunto de ligações.

        As proteínas podem ser formadas por quatro estruturas. A estrutura primária, que se define como o conjunto de aminoácidos ligados. A estrutura secundária, sendo esta a organização dos aminoácidos na forma de alfa hélice ou folha beta. A estrutura terciária, que são aglomerados da estrutura secundária. E por fim, a estrutura quaternária que é o arranjo espacial de duas ou mais estruturas terciarias. Assim, a desnaturação proteica é a modificação nas estruturas secundária, terciária ou quaternária de uma proteína, resultando em sua perda de função e diminuição da solubilidade até que o agente desnaturante seja inibido.

        A solubilidade das proteínas assim como sua estrutura tridimencional, é dependente da concentração e natureza dos sais, polaridade dos solventes, pH e temperatura. Desta forma, as proteínas podem ser classificadas em quatro grupos, conforme a sua solubilidade: Albuminas: solúveis em água a pH 6,6; Globulinas: solúveis em soluções salinas diluídas; Prolaminas: solúveis em etanol a 70%; Gluteninas: solúveis apenas em soluções muito ácidas ou muito básicas.

Objetivos: 

Objetivo geral:

Entender como a temperatura, a força iônica da solução e o pH afetam a solubilidade das proteínas.

Objetivos específicos:

1. Analisar o efeito do aumento da temperatura na solubilidade das proteínas caseína e ovoalbumina.
2. Fazer a precipitação de proteínas pela adição de ácido tricloroacético.
3. Observar o aumento da solubilidade de proteínas pelo aumento da força iônica da solução.
4. Promover a precipitação de proteínas em altas concentrações de sal.
5. Diferenciar fatores que causam a precipitação de proteínas mantendo a integridade estrutural da molécula daqueles que promovem precipitação de proteínas por desnaturação ( agentes desnaturantes).

Materiais e reagentes:

• Béquer de 50 e 100ml
• Tubos de ensaio
• Pipetas de 1, 2 e 5ml
• Bastão de vidro
• Banho maria
• Pipeta Pasteur

Procedimentos: 

Precipitação pelo calor:

Primeiro pipetou-se 2ml da solução de caseína 1% em um tubo de ensaio.

Em seguida pipetou-se 2ml da solução de ovoalbumina 1% em outro tubo de ensaio.

Aquecemos os dois tubos de ensaio em banho-maria de água fervente.

Precipitação por reagente ácido:

Primeiro pipetou-se 2ml da solução de ovoalbumina 1% em outro tubo de ensaio.

Adicionamos, gota a gota, uma solução de ácido tricloroacético 10%.

Solubilização por ação da força iônica:

Primeiro pipetou-se 3ml clara de ovo em um béquer.

Diluímos com água destilada, agitando com um bastão de vidro.

Adicionamos, em seguida, gota a gota, uma solução de cloreto de sódio a 0,1mol L-1.

Precipitação e ressolubilizaçao por ação da força iônica:

Pipetou-se 2ml da solução diluída de clara de ovo do experimento anterior.

Adicionamos 2ml deu uma solução saturada de sulfato de amônio.

Adicionamos, em seguida 5ml de H2O destilada.

Resultados:

Na precipitação pelo calor há a formação do coágulo branco que ocorre graças ao calor que, ao provocar a agitação térmica da molécula protéica, rompe as interações entre os átomos, afetando sua estrutura tridimensional e consequentemente, diminui a solubilidade da proteína.

Na precipitação com reagentes ácidos é formado sais insolúveis, foi possível identificar a formação de um precipitado esbranquiçado e viscoso grudado na parede do tubo logo que se adicionou o acido tricloroacético.

Na solubilização por ação da força iônica (Salting in), após a inserção de  solução de cloreto de sódio favoreceu a solubilidade, e também a interação proteína-solvente.

Na precipitação e ressolubilização por ação da força iônica (Salting out), após a inserção da água destilada,foi evidenciado que a água interage com as proteínas, e após a inserção de sulfato de amônio, foi nítido que o sal competiu com a proteína (Ovoalbumina) pelo solvente, e ocorreu a precipitação

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