A Bioquímica Lipídios

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO

INSTITUTO DE QUÍMICA

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Laboratório 3: Análise de Lipídeos

16/04/2018

Ana Laura Morgado   10767039

Felipe Fragoso            10766998

Giovanna Moura         10823167

Isabella Almeida         10767022

Victória Ferreira         10767064

Introdução
         

Os lipídios são compostos químicos orgânicos com estrutura bastante variada e possuem como característica a baixa solubilidade em água. Exercem diversas funções biológicas no organismo destacando-se:

• Fornecimento de energia para as células;

• Participação da composição das membranas celulares;

• Atuam como isolantes térmicos em animais endotérmicos;

• Função de vitaminas e hormônios.

Destacam-se como principais lipídios os seguintes compostos: ácidos graxos, triacilgliceróis, glicerofosfolipídios, esfingolipídios e esteroides.

Objetivo

Esta análise tem como objetivo a extração de lipídeos a partir de amostras biológicas, que neste experimento é o homogenato de fígado, a fim de examinar os principais e diferentes lipídeos presentes na referida amostra. Tal analise é possível através da cromatografia (processo através do qual moléculas presentes em misturas complexas podem ser separadas com base nas suas solubilidades em diferentes solventes e em suas mobilidades em diferentes substratos) em camada delgada.  

Materiais

• Colesterol (Sigma): 15 mg/ml.
• Triglicérides: óleo de soja 5 mg/ml.
• Ácido graxo: ácido oleico (Synth) 2,5 mg/ml.
• Placas de TLC de Sílica (Cromatofolhas de alumínio, Silicagel 60, Merck).
• Solventes orgânicos para extração (Etanol, Isopropanol, Hexano).
• Mistura de solventes orgânicos para eluição da placa TLC.
• - Solvente A para lipídeos polares -Clorofórmio:Isopropanol:Acetato de Etila:Metanol:H2O (50:50:50:21:18, v/v/v).
• - Solvente B para lipídeos neutros –Hexano:Éter etílico:Ácido Acético (70:30:1, v/v/v).
• Vidrarias: tubos de ensaio, pipetas Pasteur, cubas para TLC.
• Cristais de iodo para a revelação da placa.

Procedimentos

Nomeamos cada béquer com as letras “A” e “B” e adicionamos os solventes respectivos em cada béquer. Depois disso fizemos as marcações nas placas de TLC para início do experimento, utilizando apenas homogenato de fígado, acrescentamos no tubo de ensaio 1mL de etanol e vortexamos até obter uma solução homogênea por 30 segundos. Ainda no mesmo tubo de ensaio adicionamos 3 mL de hexano e 2 mL de isopropanol, nessa ordem, e vortexamos novamente por 1 minuto. Após isso esperamos a formação de duas fases e a transferimos a fase superior orgânica para outro tubo nomeado de “A1”. Depois disso, na placa de TLC de lipídios complexos, colocamos duas respectivas marcações 15 μL de fosfatotidilcolina (FC), fosfatidiletanolamina (FE) e A1, nessa ordem. Logo em seguida, mergulhamos a fita no solvente A. Por fim, na placa de TLC de lipídios simples, colocamos em suas marcações 15 μL de colágeno, 5 μL de ácidos graxos (AG), 5 μL de de triglicérides e 15 μL de de A1, nessa ordem. Em seguida, mergulhamos no solvente B. Após esse procedimento esperamos os solventes subirem as placas por capilaridade até atingir as linhas indicadoras do final da corrida, retirando-as assim que atingiram tais marcas e levando-as para secar na capela por 1 minuto. Por último revelamos as placas em uma cuba contendo vapores de iodo por 10 minutos para observar o aparecimento das bandas nas placas e os resultados obtidos.

Análise dos resultados

Para a realização do experimento foram utilizados os lipídios Fosfatidilcolina (FC), fosfatidiletanolamina (FE), Colesterol (Col), Ácidos Graxos (AG), Triglicérides (TG) e os lipídios contidos na amostra 1 (A1), a serem analisados, retirados a partir do homogenato de fígado.  Abaixo estão indicados a estrutura química desses lipídios, com suas principais funções.

Fosfatidilcolina (FC):  

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O lipídio FC é uma fonte provedora de colina para o corpo, sendo este um nutriente precursor do neurotransmissor acetilcolina, necessário para diversas funções cerebrais. Além disso a fosfatidilcolina é importante para a produção de substâncias surfactantes ou tensioativos, que são responsáveis por  diminuírem a tensão superficial ou influenciarem a superfície de contato entre dois líquidos, no caso do organismo humano na interface entre o líquido presente na cavidade alveolar e o ar. E também a fosfatidilcolina é o principal componente da bicamada lipídica das membranas celulares.

Fosfatidiletanolamina (FE):[pic 3]

Dentre as funções do lipídio FE é possível citar a sua presença na substância na substância branca do cérebro, seu papel na fusão da membrana e na desmontagem do anel contrátil durante a citocinese na divisão celular, seu papel como um precursor, substrato ou doador em várias vias biológicas, e desempenhar um papel na secreção de lipoproteínas no fígado.

Colesterol (Col):

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O colesterol é um lipídio com várias funções no organismo, podendo citar a conservação e síntese das membranas celulares, ser precursor para a síntese da vitamina D e de vários hormônios esteroides, poder atuar como antioxidante, auxiliar na fabricação da bile, ser utilizado no metabolismo das vitaminas lipossolúveis, ser  redutor da permeabilidade da membrana plasmática aos íons de hidrogênio e sódio, estar presente nos processos de sinalização celular, dar firmeza à membrana celular, e ser utilizado no  funcionamento dos receptores de serotonina no cérebro.

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