A Caracterização de Carboidratos

UNIVERSIDADE FEDERAL DO VALE DO SÃO FRANCISCO

CAMPUS CIÊNCIAS AGRÁRIAS

DISCIPLINA DE BIOQUÍMICA/BIOQUÍMICA GERAL

MÓDULO PRÁTICO

Aula: Caracterização de Carboidratos

Objetivos: identificar e caracterizar açúcares através de diferentes reações.

Materiais: Reativos para caracterização de carboidratos; Solução de carboidratos: frutose 1%, amido 1%, sacarose 1% e glucose 1%.

Reação de Benedict (identificação de carboidratos redutores)

Fundamentação teórica:

Os açúcares redutores possuem grupos aldeídos ou cetonas livres ou potencialmente livres, sofrendo oxidação em solução alcalina de íons metálicos como o cobre. Os íons cúpricos são reduzidos pela carbonila dos carboidratos a íons cuprosos formando óxido cuproso que tem cor vermelho tijolo.

Procedimento:

Identificar os tubos de ensaio como Glicose (Tubo 1), Sacarose (Tubo 2) e Água (Tubo 3). Pipetar, com auxílio da pipeta de 1 mL, para os três tubos de ensaio 1 mL do reativo de Benedict. Acrescentar ao primeiro tubo 1 mL de glicose, ao segundo 1 mL de sacarose e ao terceiro 1 mL de água destilada, que vai servir como um controle negativo, com pipetas de 1mL. Agitar até completa homogeneização. Deixar em banho-maria fervente por cinco minutos. Observar a reação.

Resultado esperado:

Tubo 1 (Glicose): Mudança de cor do reativo de azul para laranja, indicando resultado positivo.

Tubo 2 (Sacarose): Não há mudança do reativo, a cor permanece azul, indicando resultado negativo.

Tubo 3 (Água): Não há mudança do reativo, a cor permanece azul, indicando resultado negativo.

Resultado obtido:

Tubo1:______________________________________________

Tubo 2: _____________________________________________

Tubo 3: _____________________________________________

Reação de Barfoed (pesquisa de monossacarídeos)

A reação de Barfoed também se baseia na redução do cobre, porém é efetuada em meio ácido. Nestas condições o cobre é reduzido a quente pelos monossacarídeos com formação de óxido cuproso. Os dissacarídeos redutores dão reação positiva após um tempo de aquecimento mais prolongado.

Procedimento:

Em um tubo de ensaio pipetar 2 mL de solução de carboidrato mais 2 mL de reativo de Barfoed. Ferver diretamente na chama por 1 minuto. Na reação positiva observar a formação de um precipitado avermelhado de óxido cuproso.

Resultado esperado:

Tubo 1 (Glicose): Há formação de precipitado indicando resultado positivo.

Tubo 2 (Sacarose): Não há formação de precipitado indicando resultado negativo.

Tubo 3 (Frutose): Há formação de precipitado indicando resultado positivo.

Tubo 4 (Água): Não há mudança do reativo, indicando resultado negativo.

Resultado Obtido:

Tubo1:______________________________________________

Tubo 2: _____________________________________________

Tubo 3: _____________________________________________

Tubo 4: _____________________________________________

Reação de Bial (pesquisa de pentoses)

a) Fundamentação teórica:

A reação baseia-se na formação do furfural e hidroximetil furfural através da condensação com o orcinol.

b) Procedimento:

Em um tubo de ensaio pipetar 1 mL da solução de carboidrato, 2 mL do reativo de Bial e misturar. Aquecer em banho-maria fervente por 15 minutos. Na reação positiva há o aparecimento de cor verde.

Resultado Obtido:

Tubo1 (glicose):______________________________________________

Tubo 2 (sacarose): _____________________________________________

Tubo 3 (frutose): _____________________________________________

Tubo 4 (água): _____________________________________________

Reação de Molisch

a) Fundamentação teórica:

Os ácidos concentrados causam a desidratação de monossacarídeos. As pentoses dão como produto final o furfural, e as hexoses o hidroximetil-furfural. Estes derivados se condensam com o alfa-naftol, originando produtos coloridos. Se um oligossacarídeo ou polissacarídeo estiver presente, ele primeiro é hidrolisado em seus monossacarídeos constituintes. Esta reação também é chamada de reação geral para monossacarídeos.

b) Objetivo: Evidenciar a presença de monossacarídeos nas amostras analisadas.

c) Procedimento:

Identificar os tubos de ensaio como Glicose (Tubo 1), Frutose (Tubo 2) e Água (Tubo 3). Pipetar para o primeiro tubo 2 mL de glicose, ao segundo 2 mL de frutose e ao terceiro 2 mL de água destilada, que vai servir como um controle negativo. Acrescentar 5 gotas da solução de alfa-naftol e agitar. Pipetar cuidadosamente 2 mL de ácido sulfúrico concentrado com o tubo inclinado, deixando escorrer pelas paredes do tubo sem agitar.

e) Resultado esperado

Tubo 1 (Glicose): Ocorre a formação de um anel vermelho na interface da reação indicando resultado positivo.

Tubo 2 (Frutose): Ocorre a formação de um anel vermelho na interface da reação indicando resultado positivo.

Tubo 3 (Água): Não há formação de anel na interface indicando resultado negativo.

f) Resultado obtido

Tubo1:______________________________________________

Tubo 2: _____________________________________________

Tubo 3: _____________________________________________

Reação do Lugol