Bioquimica

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APOSTILA PRÁTICA DE BIOQUÍMICA

RIBEIRÃO PRETO/SP

AULA PRÁTICA 1 – BIOSSEGURANÇA E BOAS PRÁTICAS EM LABORATÓRIO

DEFINIÇÃO

Biossegurança pode ser definida como um conjunto de procedimentos, ações, técnicas, e dispositivos que visam eliminar ou minimizar os riscos relacionados às atividades de pesquisa, ensino, produção, desenvolvimento tecnológico e prestação de serviços, capazes de comprometer a saúde do homem, animais e do meio ambiente.

TIPOS DE RISCO

1. RISCOS DE ACIDENTES: inclui qualquer fator que exponha o trabalhador a uma situação de risco e que pode afetar sua integridade física e moral. O manuseio de máquinas e equipamentos sem proteção, situações com risco de incêndio e explosão, arranjo físico e armazenamento inadequados, entre outros, são exemplos de risco de acidentes.

2. RISCOS ERGONÔMICOS: Inclui todo e qualquer fator que possa comprometer o conforto para a execução correta das atividades de um trabalhador. Como exemplos, podemos citar: levantamento e transporte manual de peso, jornada excessiva de trabalho, monotonia, execuções repetidas de atividades, postura inadequada de trabalho, entre outros.

3. RISCOS FÍSICOS: Neste tipo de risco estão incluídas todas as diversas formas de energia a que possam estar expostos os trabalhadores e afetar sua integridade física, tais como: ruído, vibrações, ultrassom, temperaturas extremas, pressões anormais, radiações ionizantes, radiações não ionizantes, materiais perfuro-cortantes, etc.

4. RISCOS QUÍMICOS: Incluem neste grupo todas as substâncias, compostas ou produtos que possam penetrar no organismo por respiratória, como por exemplo, poeiras, fumos, névoas, neblinas, gases ou vapores, ou que, de alguma maneira, possam ter contato ou serem absorvidos pelo organismo através da pele ou por ingestão.

5. RISCOS BIOLÓGICOS: O grupo de risco biológico compreendem as bactérias, fungos, parasitos, vírus, etc.

RECOMENDAÇÕES GERAIS PARA ATIVIDADES EM LABORATÓRIO

1) Não coma, beba, fume ou masque chiclete;

 2) Não utilize cosméticos;

3) Não leve as mãos à boca, nariz, olhos, rosto ou cabelo;

4) Sempre lave as mãos antes de iniciar o trabalho e após o manuseio de produtos químicos, material infeccioso, mesmo que tenha usado luvas de proteção;

5) Objetos de uso pessoal não devem ser guardados em lugares apropriados;

6) Utilize jalecos ou outro tipo de uniforme protetor;

7) Não utilize jalecos ou uniforme protetor destinados a este trabalho fora do ambiente hospitalar;

8) Use sempre sapatos fechados. Não devem ser utilizadas sandálias ou sapatos abertos;

9) Utilize luvas quando manusear material infeccioso.

10) Mantenha os cabelos sempre presos (use toucas, se necessário) e as unhas sempre cortadas;

11) Não utilize jóias ou outros adornos.

ASPECTOS GERAIS DAS AULAS PRÁTICAS:

Ao final de cada prática, o grupo deverá entregar um relatório referente à prática executada, após a aula ou na aula seguinte, com os seguintes itens:  

a)   Objetivos

b)   Resumo dos Procedimentos

c)   Resultados

d)   Discussão (Explicação)

AULA PRÁTICA 2 – PIPETAS E VIDRARIAS UTILIZADAS EM LABORATÓRIO E SUAS UTILIZAÇÕES

AULA PRÁTICA 3 – IDENTIFICAÇÃO DE AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS

OBJETIVOS:

• Reconhecer, qualitativamente, a presença de aminiácidos e proteínas em solução, pelo método da reação da Ninhidrina (aminoácidos) e pela reação do Biureto (proteínas);
• Elaborar relatórios de aulas práticas.

MATERIAIS:

Equipamentos e vidrarias básicos de uma laboratório de Bioquímica (pipetas, pêras, micropipetas, ponteiras, tubos de ensaio, estantes, bico de bunsen, cuba de banho-maria, reagentes, etc).

Soluções: de diferentes aminoácidos, de proteína, salina, de ninhidrina e de biureto.

IDENTIFICAÇÃO DE AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS 

1.    REAÇÃO DA NINHIDRINA

Em 4 tubos de ensaio marcados ( A ), ( Pro ), ( PTN ) e ( B ), ADICIONAR:

a) nos quatro tubos - 1,0 ml da solução de ninhidrina;

b)  Em  ( A ) - 1,0 ml da solução de Alanina ou  Glicina;

    Em  ( Pro ) - 1,0 ml da solução de Prolina;

    Em  ( PTN ) - 1,0 ml da solução de Proteína;

    Em  ( Branco ) - 1,0 ml da Salina Fisiológica (NaCl - 0,9%)

c) Colocar os tubos em banho fervente durante 5 minutos ou até atingir a coloração esperada.

d)  Comparar os tubos e anote os resultados

 

2.   REAÇÃO DE BIURETO (CuSO4 a 5% alcalino)

 

Em 4 tubos de ensaio marcados ( A1 ), ( Pro1 ), ( PTN1 ) e ( B1 ), adicionar:

a)    Nos quatro tubos  - 1,0 ml do reagente de biureto

b)    Em ( A1 ) - 1,0 ml da solução de Alanina;

    Em ( Pro1 ) - 1,0 ml da solução de Prolina;

Em ( PTN1 ) - 1,0 ml da solução de Proteínas

    Em  ( B1 ) - 1,0 ml de Salina Fisiológica

c)  Agitar e comparar os tubos.

d)  Anotar os resultados.

AULA PRÁTICA 4 – PROPRIEDADES PROTÉICAS

OBJETIVOS:

O aluno deverá ser capaz de:

• Conhecer o comportamento molecular das proteínas frente à variações de temperatura (desnaturação térmica), pH (desnaturação por adição de ácidos) e de concentração de sal (efeitos ?salting in? e ?salting out? ? precipitação protéica);
• Observar os principais fatores interferentes em uma reação enzimática, como variação na concentração do substrato, de temperatura e de pH.

MATERIAIS:

Equipamentos e vidrarias básicos de um laboratório de Bioquímica (pipetas, pêras, micropipetas, ponteiras, tubos de ensaio, estantes, bico de bunsen, cuba de banho-maria, reagentes, pega-tubos, etc).