Reação de proteinas

PRÁTICA DE ALIMENTOS

Determinação qualitativa de proteínas e aminoácidos

Este procedimento tem por objetivo verificar algumas reações para aminoácidos e proteínas e verificar a presença de aminoácidos e proteínas na clara de ovo.

Introdução Teórica:

Proteínas são componentes essenciais na célula animal e vegetal. Elas são formadas por aminoácidos, por isso a hidrólise de proteínas sempre libera aminoácidos, como produto final dessa reação.

A maioria dos aminoácidos possui o grupo NH2 ligado ao C α

[pic 1]

Alguns aminoácidos possuem grupos que dão reações características, como a arginina que possui guanidino; a tirosina que apresenta o grupo fenol, entre outros, permitindo assim, a identificação desses aminoácidos.

Proteínas que possuem esses aminoácidos também respondem ao teste, permitindo verificar se um determinado aminoácido está presente na composição da proteína.

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Estrutura dos aminoácidos testados

ESTRUTURA	NOME	ABREVIATURA
CH3–CH(NH2)COOH	ALANINA	ALA
HN=CNH(CH2)3-CH(CH2)COOH              |           NH2	ARGININA	ARG
HSCH2-CH(NH2)COOH	CISTEÍNA	CYS
H2NCH2COOH	GLICINA	GLY
[pic 2]	HISTIDNA	HIS
(CH3)2CHCH2-CH(NH2)COOH	LEUCINA	LEU
H2N(CH2)4-CH(NH2)COOH	LISINA	LYS
[pic 3]	TRIPTOFANO	TRP
[pic 4]	TIROSINA	TYR

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MATERIAIS [pic 5]

Tubos de ensaio

Estante para tubos

Pipetas graduadas

Banho-maria

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Procedimento

1. Desnaturação de proteínas

Num tubo de ensaio colocar 2mLde solução proteíca e lentamente, pelas paredes do tubo, adicionar 2mL de ácido nítrico concentrado.

*O ácido nítrico reage com proteínas destruindo suas ligações quartenárias, terciárias e secundária, provocando mudanças marcantes nas suas propriedades. A proteína precipita e o processo é irreversível.

2. Reação do Biureto

Colocar em um tubo de ensaio, 2mL de biureto 1%, gotas de solução de NaOH 2,5N, e cuidadosamente com agitação, gotas de CuSO4 1%, até que a solução apresente coloração.

Repetir o procedimento substituindo o biureto por histidina pela solução proteica.

*O biureto e a histidina reagem com o sulfato cúprico, em meio básico produzindo um complexo com íon Cu2+, colorido.

*As proteínas reagem formando complexo colorido porque possuem várias ligações peptídicas, responsável pela formação do complexo.

A histidina reage porque possui o grupo [pic 6], os demais aminoácidos não reagem.

 3. Reação com Ninidrina

Adicionar 5mL de solução proteica e 0,5mL de ninidrina num tubo de ensaio e aquecer em banho-maria por 2 minutos.

Repetir o procedimento substituindo a solução proteica por qualquer aminoácido.

*Todas as proteínas e aminoácidos reagem produzindo cor púrpura. É uma reação geral para todos os aminoácidos e proteínas.

4. Reação com HNO2

Adicionar num tubo de ensaio 2mL de alanina 1%, 2mL de HCl 50% e 2mL de solução de NaNO2 10% (recentemente preparada).

Repetir substituindo a alanina pela solução proteica.

*Os aminoácidos, como indica sua fórmula geral, são aminas primárias, por isso quando tratadass com HNO3, o grupo NH2, é convertido quantitativamente em N2, e por isso também reagem quando tratadas com HNO2.

5. Reação Xantoprotéica

Adicionar 10 gotas de ácido nítrico concentrado à 1mL de tirosina 1% num tubo de ensaio e aqueça até ebulição. Adicionar 4mL de NaOH 20%.

Repetir substituindo a tirosina por triptofano, depois por fenol e finalmente pela solução proteica.

*Certos composto de benzeno reagem com ácido nítrico para formar nitrocompostos, que coram mais fortemente em meio alcalino e o triptofano contém o anel benzeno substituído, e são responsáveis pelo teste positivo.

Proteínas que contém esses aminoácidos também dão teste positivo.

Fenilanina dá teste negativo porque o anel aromático não substituído é pouco reativo.

6. Reação de Millon

Num tubo de ensaio, adicionar 1mL de tirosina 1%, 0,5mL de HgSO4 15% em H2SO4 6M. Aquecer até ebulição por 10 minutos. Esfriar e adicionar 0,1mL de solução de NaNO3 10% (recentemente preparada).