Fundamento da espectrofotometria
Projeto de pesquisa: Fundamento da espectrofotometria. Pesquise 862.000+ trabalhos acadêmicosPor: julianah • 2/9/2013 • Projeto de pesquisa • 1.045 Palavras (5 Páginas) • 843 Visualizações
INTRODUÇÃO
A Espectrofotometria pode ser definida como toda técnica analítica que usa a luz para medir as concentrações das soluções. Através da interação da luz com a matéria.O espectrofotometria e o método de análise óptico mais usado nas investigações biológicas e físico-química.O espectrofotômetro é um instrumento que permite comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto e uma quantidade conhecida da mesma substancia. (BRAND.D, Guilherme).
OBJETIVO
Fundamento da espectrofotometria
A luz de uma maneira geral é mais bem descrita como sendo uma radiação eletromagnética em virtude de sua natureza. Dualística, ou seja, ela existe e tem um comportamento de lampos elétricos e magnéticos oscilantes como a figura abaixo:
Onde:
O comprimento da onda (λ) é distancia em metros, de um pico ao outra da onda.
A frequência (v) é o grau de oscilação de ondas em função da velocidade da luz no vácuo que e representada pela constante c (c=2, 998×108m. s-1) de modo que:
λ. v = c
Espectroeletromagnético representando os comprimentos de onda correspondente a cada radiação
A técnica espectroscopia e baseada no aumento de energia em função do aumento da frequência da radiação incidida. Quando uma espécie química absorve energia na forma de fótons, seus, elétrons ficam excitados e ocorre uma transição de um orbital da mais baixa energia para o outro de maior energia. Um exemplo disso é compostos químicos que apresentam duplas ligações C=C no benzenoe C=O a carbolina, por exemplo:
bezeno
as cetonas nas ligações peptídicas
O aumento da enregia e representada pela condição de frequência de Bohr:
E = hv
E é a energia que aumenta em função da frequência, e h e a constante de Planck h= h=6,626×10-34J. S.
A transição eletrônica de duplas ligações ocorre em virtude de uma ligação dupla ser formada por um orbital sigma (σ) e um orbital (π), de modo que o elétron que esta no orbital pi ligante vai para o orbital pi antiligante que tem maior energia. (Para detalhes maiores vide TEORIA DO ORBITAL MOLECULAR). A transição nas C=C é na C=O é representada na figura abaixo, essa espécie químicas são denominadas cromóforos ou substancias que trazem cor:
Para C=C: π-π*
Para C=O: (oriental não ligante) n-π*
Aminoácidos como a fenilanina, tirosina, e triptofano são os principais responsáveis pela absorção da luz das proteínas em virtude de possuírem o anel benzênico em suas estruturas químicas, além, da ligação peptídica listada acima. A luz e absorvida na faixa de 280n m.
“LEI DE LAMBERT-BEER”
A “força vital” da espectrofotometria esta fundamentada na lei da Lambert-beer, que estabelece: A “absorbância e diretamente proporcional a concentração da solução da amostra”.
Ou:
Log (I/I0)=εcl
A= εcl
Onde:
A é absorbância
ε é o coeficiente de extinção molar e
I é o comprimento da cubeta
Os componentes principais de uns espectrofotômetros são apresentados e suas respectivas funções:
Fonte de luz: E composta por uma lâmpada de deutério e uma lâmpada de tungstênio (semelhante à lâmpada de carro) A lâmpada de deutério emite radiação UV e a tungstênica emite luz visível.
Monocromador:Algum espectrômetro ainda possui um prisma como monocromador, porém os mais modernos possuem dispositivos eletrônicos que transformam a luz incidida em vários comprimentos de ondas, em um só comprimento, ou seja, a luz monocromática.
Cubeta:E o recipiente próprio para conter amostra que será utilizada analise os curtas podem ser de quartzo por que o vidro e o plástico absorvem UV e causa reflexão de luz visível.
Detector:O detector e um dispositivo que detecta a fração de luz que passou pela amostra e transfere para o visor e para o computador o coplado as aparelho.
Análise espectrofotométrica
Passo 1: Amostra deve ser preparada com a quebra da amostra por métodos mecânicos, químicos ou físicos.
Passo 2: A amostra é salubrizada no solvente escolhido em um balão volumétrico limpo e seco.
Importante: O solvente na maioria das vezes e a água porem, quando se trata amostras apolares que precisam ser diluídas em solventes orgânicos nunca utilize alcemos, alcinos, cetonas,
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