Os Meios de Cultura

MEIOS DE CULTURA

FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA

O meio de cultura é um procedimento realizado em laboratório utilizado para cultivar micro-organismos afim de estuda-los. Em exames clínicos principalmente, o estudo dos micro-organismo é de grande necessidade já que é a partir do estudo que se pode chegar a uma decisão de como tratar uma situação em que há o aumento de micro-organismo causando doenças.

Para que os micro-organismos sejam cultivados é necessário que haja um meio para que eles se proliferem. Esse meio consiste em uma preparação química constituída de vários nutrientes importantes para a vida de cada micro-organismo. É necessário conhecer o potencial de crescimento de cada meio de cultura e adequar ao perfil microbiológico esperado para cada material, só assim será realizada uma análise perfeita da bactéria.

Os meios de cultura podem ser preparados manualmente em laboratório como já pode ser comprado já pronto pelo laboratório que irá realizar a análise. Segundo a agência de vigilância sanitária, os meios comerciais devem ser hidratados em pequena quantidade de água até que todo o meio fique úmido e só depois deve-se acrescentar o restante da água. Enquanto que os meios preparados não comerciais, devem ser pesados separadamente em papel manteiga ou papel alumínio e adicionados em um único frasco (normalmente em béquer), hidratados em pequena quantidade de água até que todo o meio fique úmido e só depois deve-se acrescentar o restante da água.

Existem meios de cultura para transporte e conservação, meios para crescimento e isolamento e meios comerciais para provas de identificação. Os principais meios para o transporte e conservação são: Cary Blair, Salina Tamponada, Meio Stuart e Ágar nutriente. Tais meios são utilizados para garantir que as bactérias sobrevivam uma vez que ofertam vários nutrientes para sua sobrevivência. O Cary Blair é utilizado para o transporte de material fecal e consequente conservação dos micro-organismos. A salina Tamponada é um meio de transporte de fezes que mantem a bactéria viável. Nesse meio há um crescimento elevado de Shigella flexneri. O meio STUART é utilizado para o transporte de diversos materiais e consequente conservação dos micro-organismos patogênicos como: Haemophilus spp., Pneumococcus, Salmonella spp., Shigella spp., entre outros. O Ágar nutriente é um meio muito utilizado em laboratório. Nele há um crescimento bom a excelente de Escherichia coli e Streptococcus pneumoniae.

Realizado o transporte e conservação dos micro-organismo, estes serão levados para os meios de crescimento e isolamento, que são: Ágar Chocolate, Ágar Thayer-Martin Chocolate, Ágar Salmonella-Shigella, Caldo Selenito, Caldo Tetrationato ,Caldo Tioglicolato, Caldo Tioglicolato, Ágar Mac Conkey,  Ágar Sangue, Ágar CLED, Caldo BHI, Löwenstein Jensen, Meio bifásico: Löwenstein e Middlebrook, Ágar Mycosel e  Ágar Sabouraud  . Cada meio permite o crescimento de um micro-organismo especifico, por exemplo, o Ágar Chocolate permite o crescimento de micro-organismos exigentes como o Haemophilus spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp. Enquanto que o Ágar salmonella-shigella seleciona e isola espécies de Salmonella e Shigella.

Por fim os micro-organismo são levados aos meios para provas de identificação que são principalmente:  Base de nitrogênio para leveduras – Yeast Nitrogen Base, Ágar Citrato Simmons, Ágar Bílis-Esculina, Ágar Sangue – CAMP,  Caldo base de Moeller, Ágar Dnase, Ágar Esculina, Ágar Fenilalanina, CTA – Cystine Tryticase Agar, Caldo Triptona e SIM, Meio Caldo Triptona , Caldo Malonato, Caldo Nitrato, Meio base para oxidação e fermentação – OF, Ágar TSI – triplo açúcar ferro e Ágar base uréia (christensen).

Dando continuidade à identificação microbiana, são utilizados DISCOS específicos para que se possa identificar os microrganismo. Dentre os discos utilizados estão:

BACITRACINA (Identificação presuntiva de Streptococcus beta hemolítico do grupo A (S. pyogenes).

NOVOBIOCINA (Separa cepas de Staphylococcus saprophyticcus (Novobiocina resistente) das demais cepas de Staphylococcus coagulase negativa de importância clínica; Staphylococcus saprophyticcus é a única espécie isolada em humanos como causadora de infecções urinárias).

OPTOQUINA (Separa Streptococcus pneumoniae dos demais Streptococcus alfa hemolíticos).

         Os micro-organismos são levados aos meios para teste de sensibilidade aos antimicrobianos para que se possa identificar o melhor antimicrobiano para tratar as patologias causadas pelos organismos microbianos. Dentre esses meios estão:

HTM – HAEMOPHILUS TEST MÉDIUM PRINCÍPIO (Meio suplementado que permite o crescimento das espécies mais exigentes de Haemophilus, pois contém em sua fórmula suplementos à base de NAD e cisteína).

ÁGAR MUELLER HINTON (Meio utilizado para a realização do teste de avaliação da resistência aos antimicrobianos pelos métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus, Enterococcus sp).

ÁGAR MUELLER HINTON SANGUE (Meio utilizado para a realização do teste de avaliação da resistência aos antimicrobianos pelos métodos de difusão em disco e E-test de cepas de Streptococcus pneumoniae e estreptococos beta-hemolíticos dos grupos A,B,C e G conforme instruções do NCCLS).

        Sem dúvida, tão importante quanto os meios de cultura são os equipamentos presentes em um laboratório utilizados para a esterilização. De nada adiantaria se após a identificação do microrganismo todo o material utilizado para a cultura fosse descartado no lixo sem antes passar pelas medidas de higienização.

        Um aparelho bastante importante em um laboratório é a Autoclave. A Autoclave é utilizada para esterilizar vidrarias, metais, matérias à base de celulose, roupas médicas etc. Tal aparelho utiliza o calor úmido que é baseado no princípio de alta pressão e calor por vapor. O aparelho desnatura as proteínas dos micro-organismo à 120°C, o que faz com que tais organismo morram.