Relatório de Aula Prática

1. Introdução

O sangue é um sistema complexo composto por uma porção líquida e sólida. A composição sanguínea é representada pela sua porção celular que circula suspensa no plasma, o meio líquido.

A porção celular é composta por eritrócitos, leucócitos e plaquetas. O plasma é constituído por água em sua maior parte e o restante constitui proteínas, sais minerais e constituintes orgânicos em dissolução.

Hematopoese é o mecanismo de síntese de células sanguíneas que ocorre a partir de uma célula tronco comum que se auto-renova e da origem ás células descendentes de linhagens progenitoras mielóide e linhagens progenitoras linfoides. A medula óssea se mantém como principal órgão hematopoético no decorrer da vida.

A confecção do esfregaço sanguíneo é o fator mais importante para a realização de um hemograma. A hematoscopia é parte do eritrograma que tem o objetivo de identificar a morfologia das hemácias e se há alteração morfológica celular ou relacionadas a hemoglobina.

A hematoscopia é realizada através do esfregaço que deve ser corado com um corante hematológico e posteriormente observado no microscópio com a objetiva no aumento de 100x.

1. Objetivos

Promover o contato dos alunos com amostras de sangue à fresco, e realizar a técnica do esfregaço sanguíneo para observar, através do microscópio óptico, os componentes do sangue humano e suas características.

1. Materiais e reagentes

Equipamentos:

• Microscópio;
• Pipetas;

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Materiais e Reagentes:

• Luvas;
• Garrote;
• Algodão;
• Álcool 70%;
• Seringa;
• Agulha;
• Caneta para identificação dos tubos;
• Estante para tubos;
• Tubos com EDTA;
• Curativo adesivo;
• Ponteiras descartáveis;
• Lâmina;
• Lâmina extensora;
• Lamínula;
• Kit panótico rápido 1,2 e 3 para coloração das células;;
• Solução fisiológica
• Água
• Descarpack

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1. Métodos

Inicialmente foi coletada uma amostra de sangue de uma colega voluntária e colocado em dois tubos de tampa roxa com anticoagulante EDTA e em outros dois tubos de ensaio; um contendo água e o outro contendo solução fisiológica.

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1ª Amostra: Sangue Total em EDTA

• Na lente objetiva de 4x, foi observado um aglomerado de células, sem uma possível identificação das mesmas, como na imagem abaixo.

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• Na lente objetiva de 10x, observam-se pequenos espaços entre os aglomerados de células:

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• Na lente objetiva de 40x, podemos visualizar um emaranhado de células enfileiradas.

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2ª Amostra: Sangue Total Diluído em Solução Fisiológica

O sangue total diluído em solução fisiológica forma uma substância isotônica que é bem tolerado pelas células mantendo sua integridade.

• Na lente objetiva de 4x, observa-se apenas um imenso grupo de células, porém sem muita definição.

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• Na lente objetiva de 10x, observa-se, um grupo de células íntegras, porém mais espaçadas.

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• Na lente objetiva de 40x, observa-se células individuais, como

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3ª Amostra: Sangue Total Diluído em H2O

Não há possibilidade de visualização das células, pois as hemácias se romperam devido à irregularidade do pH, solvente e soluto. A água destilada é uma solução hipertônica que a célula não tolera.

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Coloração de esfregaço de sangue

Para a técnica de esfregaço sanguíneo é utilizada uma mistura especial de corantes para tingir todas as células sanguíneas. Existem muitas variações como a coloração de Leishman, Giemsa, Wright ou May-Grünwald. Tratam-se de modificações da coloração a base de corantes Romanovsky.

A denominação confere ao médico russo Dmitri Leonidovich Romanowsky os créditos pelo desenvolvimento do método, em 1891. A mistura de corantes inclui um corante básico e um corante ácido, consistindo basicamente em azul de metileno e eosina Y (ou similar).

A afinidade das estruturas celulares por corantes específicos ou por combinações de corantes dessa mistura proporciona uma visualização diferenciada das células sanguínea.

Para diferenciar as células, foi necessário utilizar corantes do kit panótico rápido; esses corantes são à base de hematoxilina-eosina, eles facilitam a identificação e diferenciação dos leucócitos. A hematoxilina é básica e cora os núcleos com cor azul, já a eosina é ácida e cora o citoplasma com cor rosa, O kit é composto por 1 fixador e dois corantes:

* Panótico rápido n° 1: compõe-se por uma solução de triarilmetano a 0,1% (fixador de esfregaço), líquido de coloração esverdeada e aspecto límpido;

* Panótico rápido n° 2:compõe-se por uma solução de xantenos a 0,1% (cora as células ácidas), liquido de coloração rosada e aspecto límpido;

* Panótico rápido n° 3: compõe-se por uma solução de tiazinas a 0,1% (cora as células básicas), liquido de coloração azulada e aspecto límpido;

O kit panótico cora tanto o citoplasma como o núcleo das células sanguíneas.