Solutos - Hemolise

Objetivo

Demonstrar e ilustrar os seguintes aspectos relacionados com o movimento de água através da membrana celular:

• Osmose
• Pressão osmótica
• Equilíbrio osmótico
• Osmolaridade
• Fluxo de volume
• Coeficiente de reflexão

Materiais

• Heparina ou oxalato de sódio (anticoagulantes)
• Sangue
• Bastão de vidro
• Papel absorvente
• Estante para tubos de ensaio
• 18 tubos de ensaio de 15ml
• Água destilada
• 8 pipetas cilíndricas de 10ml
• Luvas
• Centrifuga

Soluções

• NaCl 150 mM, 500mM e 1000mM
• Ureia 300mM e 500mM
• Sacarose 300mM e 500mM
• Cloreto de Amônio 150mM

Métodos

1 – Coletar 2 ml de sangue humano e adicionar anticoagulante na concentração aproximada de Heparina: 0,2 mg/ml ou Oxalato de Na+: 1 a 2 mg/ml de sangue;

2 – Preparar uma bateria de 11 tubos de ensaio contendo soluções de NaCl de concentrações decrescentes, obtidas por mistura de agua a NaCl – 150mM nas seguintes proporções de volume (ml): 0/10; 1/9; 2/8; ... 9/1; 10/0. Homogeneizar a mistura por agitação;

3 – Colocar 10 ml das soluções abaixo discriminadas em tubos de ensaio distintos: NaCl 500 mM e 1000nM; Ureia 300 mM e 500mM; Sacarose 300 mM e 500mM; NH4Cl 150mM;

4 – Adicionar 80 µL de sangue (3 a 4 gotas) a cada um dos tubos, cobrir com o dedo polegar limpo e inverter os tubos lentamente para misturar sem formação de espuma;

5 – Centrifugar os tubos 13.000 rpm durante 3 minutos. Retira-los cuidadosamente da centrifuga. Observar o aspecto do sobrenadante, o volume e o aspecto do sedimento. Descrever os fatos observados, classificar e anotar os tubos de acordo com o aspecto das soluções.