TÉCNICA DE ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS

[pic 1]                                                          [pic 2]

FACULDADE DE CONCÓRDIA - FACC

DISCIPLINA DE MICROBIOLOGIA AGRÍCOLA

Prof Lilian Cerbaro Galiazzi

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA

“TÉCNICA DE ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS”

ALUNO: Eduardo Lucas Morche

Concórdia 13 de Abril de 2016.

INTRODUÇÃO

Nesta prática estaremos fazendo o preparo de meio de cultura para o desenvolvimento de fungos.

MATERIAIS E MÉTODOS

1. Assepsia dos materiais

- MATERIAL

Autoclave, balança, espátula, etiquetas

Agar, batata inglesa, sacarose (dextrose)

Água destilada

Erlenmeyer (2L), tampão de algodão 

Faca de cozinha

Placa de petri (plástico ou vidro)

Tubo de ensaio

Coador

Proveta graduada

Funil de distribuição de meio de cultura em tubos

Caixa germ Box

Algodão

Papel alumínio

Atilho (borrachinha de dinheiro)

3 - PREPARO DO MEIO BASICO (BDA – Batata sacarose Agar)

Pesar 200g batata (lavada), com casca e fatiar

Cozinhar em 1 L água destilada por 20 min.

Coar o caldo da batata em proveta graduada e ajustar o volume final para 1 L, com água destilada.

Pasar 20 g sacarose e 12 g Agar.

Verter o caldo da batata no erlenmeyer de 2L sobre os ingredientes já pesados.

Tampar o erlenmeyer com tampão de algodão, papel de alumínio e atilho.

Utoclavar por 20 min a 127ºC.

Retirar da autoclave e deixar baixar a temperatura do meio e se necessário, adicionar antibiótico (na câmara de fluxo).

Verter em placas de petri e em tubos de ensaio.

Re-autoclavar os tubos (com tampão de algodão) que foram vertidos com meio de cultura deixar solidificar, identificar e armazenar em geladeira.

.

[pic 3]

Foto: Meio de Cultura

OBS: O preparo do meio de cultura já havia sido feito pela Professora Lilian então só foi feito o procedimento de isolamento e preparo da lâmina.

TÉCNICA DE ISOLAMENTO DE FUNGOS

1. Introdução

O isolamento somente é possível com parasitas necrotróficos. Por isso, os agentes causais de oídios, ferrugens, carvões, míldios, com exceção de Phytophtora, Taphrina não podem ser isolados e cultivados em meio sintético.

2. Material

Placa de petri com BDA

Tubo de ensaio com meio natural

Agulha histológica/alça de platina

Material vegetal infectado: Hastes, sementes, folhas, frutos com lesões

Hipoclorito de sódio comercial 1%

Álcool 70%

Lamparina com álcool

Tesoura

3. Procedimento

Corta-se em pedaços pequenos o tecido da planta  sendo que para a realização da identificação do fungo não devemos pegar o tecido já atacado pega-se entre o tecido atacado e o aparentemente normal.

Tendo o tecido selecionado é importante não colocado da forma que foi retirado, ou seja, o mesmo estará contaminado então se lava com álcool 70%%, Hipoclorito e água destilada, na seguinte seqüência: álcool 70% - Hipoclorito – água destilada.

Se for trocada a seqüência  a função do álcool vai quebrar a tensão superficial e o Hipoclorito matará os fungos, sendo que a função do álcool nesse processo é desinfetar,o hipoclorito retirada dos fungos indesejáveis e a água eliminar os resíduos do álcool e do hipoclorito.

Deve se pegar o tecido com uma pinça esterilizada e coloca – los no álcool durante 3min, após passar para o Hipoclorito também por 3min e em seguida colocar o tecido na água destilada por 3vs.

 [pic 4][pic 5]

Foto: Álcool com o Tecido                   Foto: Hipoclorito com o Tecido

Secagem do tecido

Neste procedimento retiram-se os tecidos da água destilada e coloca – se no papel esterilizado e secar os mesmos com cuidado para não danificar o tecido. O objetivo da secagem é eliminar resíduos de água e do papel esterilizado é evitar a presença de bacteriose.

[pic 6]

Foto: Secagem do Tecido

Procedimento de colocação do tecido no meio de cultura

Após a secagem do tecido ele é colocado no meio de cultura, com uma distancia entre cada tecido para que o fungo possa crescer e se expandir. As placas de Petry foram colocadas no ambiente controlado com temperatura controlada e fito período.