RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA: DETERMINAÇÃO DE MASSA SECA DE MICRORGANISMOS

 

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

INSTITUTO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS

LABORATÓRIO DE ENGENHARIA BIOQUÍMICA

                RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA

DETERMINAÇÃO DE MASSA SECA DE MICRORGANISMOS

                                                                  Discente: 

                                                                                      Amanda Letícia Santos

                                                                                 Ana Carolina Rocha

                                                                                         Diene Sara Lopes Souza

                                                                                       Ivia Caroline Cavalcanti

                                                                                       

                                                           Docente: 
                                                                       Igor Viana Brandi

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1. INTRODUÇÃO

A desidratação é um processo que consiste na eliminação de água de um produto por evaporação, com transferência de calor e massa. É necessário fornecimento de calor para evaporar a umidade do produto e um meio de transporte para remover o vapor de água formado na superfície do produto a ser seco (NATUREX,2014)

Segundo Malajovich (2015), a determinação de matéria seca tem como princípio a desidratação das células, sendo que todas as células possuem uma quantidade significativa de água em seu interior. Através dessa técnica pode-se saber o peso das células quando desidratadas e quando comparadas com o peso total antes do aquecimento. Ainda segundo Malajovich (2015), esse método possui algumas limitações, pois não é possível quantificar o número de células através de seu peso, porém, com essa informação pode-se calcular a média de peso de uma célula na suspensão.

A obtenção de massa seca é usualmente procedida em laboratório. A massa vegetal úmida é colocada para desidratar no sol ou na estufa (60º C), até que seu peso se mantenha constante. Trata-se de um procedimento lento que pode ser acelerado quando se dispõe de um forno de micro-ondas. (MALAJOVICH, 2015).

O método de secagem convencional utiliza estufa de circulação forçada de ar com uma demanda de 12 a 72 horas, à temperatura média de 65ºC, até atingir massa constante. Já o método alternativo, com uma maior velocidade na secagem das amostras demorando apenas 10 a 20 minutos (FIGUEIREDO et al., 2004).

2. OBJETIVO        

Objetivou-se com a aula prática realizar medida de massa seca de leveduras através de cadinhos de papel alumínio, eppendorfs e membrana de filtro de papel e relacionar a DO obtida do crescimento da Saccharomyces cerevisiae com a massa seca obtida, pelos alunos que cursam a disciplina.

3. MATERIAL E MÉTODOS

        Realizou-se no Laboratório de Biotecnologia da Universidade Federal de Minas Gerais, Instituto de Ciências Agrárias a seguinte aula prática: Determinação de massa seca de microrganismos.

3.1. Materiais utilizados

Os materiais utilizados na aula prática foram: kitasato, cadinhos, membrana filtrante, eppendorfs, dessecador, placas de petri, pipeta automática e espectrofotômetro.

3.2. Métodos

A primeira parte da aula consistiu em medir a densidade óptica do meio de cultura no espectrofotômetro (610 nm), foram realizadas as diluições necessárias, utilizou-se um meio de cultura contendo extrato de levedura (1%), peptona (2%) e glicose (25g/L) que foi previamente preparado e inoculou-se a levedura Saccharomyces cerevisae, este meio foi incubado no shaker durante 24 horas anteriores a aula prática. Em seguida, separou-se três cadinhos, que foram devidamente identificados e inseridos na estufa a 105 °C durante 1 hora. Depois, os cadinhos foram retirados da estufa e resfriados no dessecador durante 10 minutos. Posteriormente, foi inserido 10 mL do meio de cultura em cada cadinho e estes foram inseridos novamente na estufa a 100 °C por no mínimo 24 horas e, então, foram resfriados no dessecador para a pesagem da massa seca obtida em cada cadinho.

O procedimento realizado com os eppendorfs foi semelhante ao anterior, contudo, utilizou-se 2 mL do meio de cultura em cada e os mesmos foram submetidos ao processo de centrifugação para, então, serem levados à secagem. Na terceira parte utilizou-se uma membrana filtrante e um kitasato e filtrou-se 10 mL do meio de cultura. Repetiu-se este procedimento até a obtenção de três membranas contendo o retentado do procedimento da filtração. As membranas foram submetidas a secagem na estufa a 105 °C por no mínimo 48 horas, após esse período, foram resfriadas no dessecador e pesadas para a obtenção da massa seca obtida em cada membrana.

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO

        A quantificação celular é de grande importância para o controle do número de microrganismo em determinado procedimento, esta poderá influenciar diretamente no rendimento de um processo onde as concentrações de certas células são de suma importância. Por exemplo, a concentração da levedura Saccharomyces cerevisiae, um fungo unicelular, pode influenciar diretamente no processo de produção de cerveja, entre outros. São vários os métodos de quantificação de microrganismos em uma cultura ou suspensão, eles se dividem basicamente em dois grandes grupos: quantificação por contagem direta e por contagem indireta (LIMA et al., 1977).

Para a obtenção da massa seca (Tabela 1) foi necessário calcular a diferença entre os resultados obtidos após a secagem e os valores de massa dos recipientes vazios utilizados para o experimento (cadinho de papel alumínio, eppendorf e membrana de papel). Todos os meios utilizados para a obtenção da massa seca, através da secagem, foram realizados em triplicata visando o alcance de resultados mais precisos.

Tabela 1 – Relação entre os valores da massa seca obtida e densidade ótica do meio de cultura contendo a levedura Saccharomyces cerevisae.