O Aminoácidos e Proteínas

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

CENTRO DE TECNOLOGIA E GEOCIÊNCIAS

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUÍMICA

GRADUAÇÃO EM QUÍMICA INDUSTRIAL

DISCIPLINA: BIOQUÍMICA APLICADA

DOCENTE: SARAH HORACIO DE OLIVEIRA

AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS

EXPERIMENTOS REALIZADOS EM:

17 de setembro de 2018

24 de setembro de 2018

DISCENTES:

JOÃO LUIZ DA SILVA PEREIRA CHACON

PETRUS VINÍCIUS ALECRIM DA SILVA

VITHOR GABRIEL RAMOS MARQUES DE OLIVEIRA

RECIFE, 08 DE OUTUBRO DE 2018

1 INTRODUÇÃO

As proteínas são as moléculas orgânicas mais abundantes nas células e correspondem a cerca de 50% ou mais de seu peso seco. São encontradas em todas as partes de todas as células, tendo funções fundamentais. Em virtude desta importância, as proteínas têm sido largamente estudadas, no que diz respeito à sua síntese ou aproveitamento metabólico. Proteínas biologicamente ativas são polímeros que consistem de aminoácidos ligados por ligações peptídicas covalentes. com diversa configurações (estruturas tridimensionais) diferentes.

Os α-aminoácidos encontrados em peptídeos e proteínas consistem de um grupo funcional ácido carboxílico (-COOH), um grupo amino (-NH2) e um hidrogênio (-H) ligados ao átomo de carbono-α. Grupos-R (cadeia lateral) distintos, também estão associados ao carbono-alfa, desta forma, o carbono-α encontrado nos aminoácidos é tetraédrico ou assimétrico (exceto no caso da glicina onde o grupo-R é o hidrogênio). Um aminoácido difere de outro justamente pelo grupo-R (cadeia lateral). Nesta prática visou-se identificar as proteínas por meio de reações usando reagentes específicos, assim como pela ação da desnaturação.

Visando quantificar uma determinada proteína em material biológico, vários métodos podem ser utilizados, dentre eles, o método do biureto. O método do biureto é um dos mais utilizados para determinar a concentração de proteínas em uma amostra. Esse método foi proposto em 1914 baseado na observação de que substâncias contendo duas ou mais ligações peptídicas formam um complexo de cor roxa com sais de cobre (CuSO4) em soluções alcalinas. A intensidade da cor formada que pode ser medida espectrofotometricamente a 540 nm é proporcional à quantidade de proteína da solução. Embora altamente específico para peptídeos e proteínas, o método do biureto está sujeito a interferências por parte de compostos presentes nas amostras que também possam interagir com o Cu2+ (por exemplo açúcares redutores) e outros que possuam grupos –CO-NH- (por exemplo uréia) Esse método apresenta como principal vantagem fornecer resultados semelhantes para proteínas diferentes e como principal defeito sua baixa sensibilidade.

2 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

Após a separação das amostras de uma solução de clara de ovo em água destilada numa proporção de 3/1, em vários tubos de ensaio, foram feitos os seguintes testes:

Desnaturação por calor - Três tubos de ensaio com 3 mL da solução foram aquecidos sob a chama de um bico de Bunsen, até que foi observada a precipitação das proteínas desnaturada. Depois disso, foi adicionado ao meio, em cada um dos tubos, água, etanol ou acetona.

Desnaturação por ácido - Adicionou-se, gota a gota, uma solução de ácido clorídrico 10% num tubo de ensaio contendo a amostra, até que o precipitado foi observado.

Desnaturação por solventes orgânicos - Em dois tubos de ensaio com 1 mL da solução foram adicionados 1 mL de etanol e 1 mL de acetona, respectivamente. Foi observada a formação de precipitado.

Solubilidade a diferentes pH's - Foram separados 3 tubos de ensaio com 2 mL da solução cada. No primeiro, adicionou-se 2 mL de uma solução a pH 2. No segundo, 2 mL de uma solução a pH 7, e no terceiro, 2 mL de uma solução a pH 10.

Reação Xantoproteica: Pesquisa de tirosina e triptófano - Em um tubo de ensaio com 3 mL da solução foi adicionado 1 mL de uma solução de ácido nítrico. A seguir, o tubo foi aquecido no bico de Bunsen, sendo observada a formação de um precipitado amarelo. Após isso, foi adicionado ao meio 0,5 mL de NaOH 2M, e observou-se a mudança de coloração do precipitado para laranja.

Pesquisa do triptófano - Num tubo de ensaio com 2 mL da solução foi colocado 2 mL de ácido acético glacial. Após a agitação, foi colocado 5 mL de ácido sulfúrico concentrado, escorrendo o líquido nas paredes do tubo aos poucos. Agitou-se levemente, e foi observada a formação de uma camada com coloração amarela.

Reação de biureto das proteínas - Em um tubo de ensaio com 3 mL da solução foram adicionadas 3 gotas de uma solução de sulfato cúprico 5%. O observada a formação de um precipitado. Foi adicionada, gota a gota, uma solução de NaOH 10% até o momento em que o precipitado retornou a solução. Foi observada a aparição de uma coloração violeta em toda a solução.

No segundo experimento, em 5 tubos de ensaio, foram feitas 5 soluções de 2 mL de albumina bovina nas concentrações de 2 g/L, 4 g/L, 6 g/L, 8 g/L e 10 g/L, diluindo uma solução padrão de 10 g/L. Depois, foi feita a reação com 8 mL de reagente de biureto, fazendo 5 soluções de 10