Reação de biureto

                                        REAÇÃO DO BIURETO

1 .Introdução:As proteínas são as macromoléculas mais abundantes nas células vivas. Elas ocorrem em todas as células e em todas as partes destas. As proteínas também ocorrem em grande variedade; milhares de diferentes tipos, desde peptídeos de tamanho relativamente pequeno até enormes polímeros com pesos moleculares na faixa de milhões, podem ser encontrados em uma única célula. (LEHNINGER, 2002)

A detecção de proteínas em materiais biológicos envolve reações específicas com determinados reativos, os quais originam substâncias coloridas que absorvem luz na região visível, permitindo a sua quantificação.

Dentre os métodos utilizados, situa-se o método do biureto, que é baseado na reação do sulfato de cobre em meio alcalino (reativo do biureto), com proteínas e peptídeos. O nome do método provém do fato de que a uréia aquecida dará reação positiva, com desprendimento de amônia.

O reativo de biureto é uma solução de sulfato de cobre (CuSO4) e tartarato duplo de sódio e potássio (KNaC4H4O6) que ao reagir com os íons cúpricos, forma um produto de coloração violáceo. Esse reativo é utilizado na identificação de compostos protéicos, pois as ligações existentes na molécula de biureto são semelhantes às ligações peptídicas na formação de proteínas.

A reação do biureto é positiva para proteínas e peptídeos com três ou mais resíduos de aminoácidos. A reação é também positiva para substâncias que contêm duas carbonilas (-CONH2) ligadas diretamente ou através de um único átomo de carbono ou nitrogênio. Dependendo da complexidade da proteína ou do peptídeo em questão, a cor do produto de reação a presença do biureto varia substancialmente: proteínas dão coloração violeta, peptídeos dão coloração rosa. Quanto maior for a quantidade de proteínas no meio maior será a intensidade de cor.

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2.Objetivo: O objetivo dessa prática foi identificar os grupos nitrogenados (Proteínas). Caracterizar a presença de proteínas em material biológico através da reação do biureto, a precipitação de proteínas com e sem desnaturação e relacionar as observações práticas com a teoria de propriedades gerais como estrutura e isolamento de proteínas.

3.Materiais , Metódos e Procedimentos:

Materiais: 5 tubos de ensaio

                  Pipetas Graduada (Plásticas ou de vidro)

                  Conta gotas ou Pipeta Pasteur

                  Água destilada

                  Clara de ovo

                  Gema de ovo

                  Leite

                  Extrato de soja

Metódos: No tubo 1 adicionamos 2ml de água

No tubo 2 adicionamos 2ml de clara de ovo diluída em 50 ml de água

No tubo 3 adicionamos 2 ml de gema de ovo diluída em 50 ml de água

No tubo 4 adicionamos 50g de leite em pó em 100 ml de água

No tubo 5 adicionamos  extrato de soja em 100 ml de água destilada

Procedimentos:

Numeramos os tubos de ensaio de 1 a 5 ;

A cada tubo de ensaio adicionamos gota a gota do reagente de biureto;

Agitamos os tubos;

• Observamos as colorações apresentadas após o final das reações e anotamos o resultado.

 O aparecimento de coloração violeta indica que os íons Cu2+ provenientes do CuSO4 formaram complexo com ligações peptídicas presentes na amostra, indica que se trata de uma proteína ou peptídeo.

4  RESULTADOS

1   2 3 4

Água destilada            Clara de ovo            Gema de ovo              Leite

Azulado              Violeta               Violeta             Violeta

Azulado                   Violeta                   Violeta                   Violeta

           5                                 Extrato de soja             Azulado                  Azulado

Resultado: No tubo 1 Resultado NEGATIVO:(Desnaturação) Coloração azul muito pálida,a água não tem componentes de proteínas em sua composição.

No tubo 2 Resultado POSITIVO : Coloração púrpura ,a clara de ovo contém proteínas (abulmina) inclusive que apresentam ligações peptídicas.

No tubo 3 Resultado POSITIVO:Coloração púrpura,a gema de ovo contém proteínas

No tubo 4 Resultado POSITIVO:Coloração púrpura ,o leite apresenta várias proteínas em sua composição.

No tubo 5 Resultado NEGATIVO: Coloração azulada(Desnaturação).

O tubo contendo água destilada no qual não ocorreu reação,serve de referência para os tubos restantes ,concluindo-se que os tubos cuja reação foram semelhante á do biureto com a água destilada e teve resultado final negativo.  Por outro lado nos tubos que ocorreram as reações diferentes a da água destilada quando se adicionou o biureto ou  seja apresentara uma coloração violeta ou bem mais escura que o azul pálido apresentado na reação com água destilada considerou-se o resultado final positivo.

Proteínas dão coloração violeta ,peptídeos dão coloração rosa para que a reação ao biureto seja positiva há necessidade da presença de pelo menos duas ligações peptídicas na molécula ,portanto,aminoácidos e dipeptídeos não apresentam reação positiva ao biureto.

A intensidade da cor varia com a concentração de proteínas.

No tubo 1 e 5 houve desnaturação, no momento da adição já se observou a formação do precipitado de coloração branca,Depois observou-se a formação do precipitado na forma de pequenos fios, mas a solução continuou com cor inicial. No tubo que continha a proteína, observou-se que antes da adição do sulfato de cobre era incolor, agora apresenta coloração púrpura. Já no tubo onde continha aminoácido, que também no início era incolor, com a adição do sulfato ficou com uma coloração azulada.