Teste do Efeito da Toxicidade de Diferentes Concentrações

Teste do efeito da toxicidade de diferentes concentrações de cobre aplicado à espécie “Rhamdia quelen” (jundiá).

Amanda B. Reis, Jessica S. Costa, Eduardo S. Neto, Ana Carolina Willemann, Giu Moon, Mariana Bonella, Larissa... , Daiana Zanetti

1. Introdução

A água é um recurso natural imprescindível para todas as formas de vida do planeta. Sua preservação é essencial para o futuro da sobrevivência dos diversos organismos, no entanto, a interação dos recursos hídricos naturais com a evolução das atividades humanas comprometem esses sistemas (GIUPPONI & SGOBBI, 2013).

Os organismos aquáticos estão em constante contato com substâncias toxicas em seus organismos, devido a isso amplos estudos toxicológicos constantes são necessários já que são lançadas novas substancias no mercado todos os anos. Entre os organismos mais utilizados nessas pesquisas estão diversas espécies de peixes, entre elas o jundiá, Rhamdia quelen, endêmico da América do Sul, que pode chegar a 50 cm de comprimento e 3 kg. Possui hábitos noturnos e preferencia por locais calmos e profundos (GOMES et al, 2000).

Com base nisso, este trabalho teve como objetivo determinar a atividade enzimática das enzimas acetilcolinesterase, catalase e GST em três órgãos diferentes, cérebro, fígado e brânquias, respectivamente, de peixes da espécies Rhamdia quelen expostos a 4 concentrações de cobre diferentes, 0,04 mg/L, 0,08 mg/L, 0,16 mg/L e 0,32 mg/L.

1. Objetivos

1. Materiais e Métodos

3.1 Peixes

Foram utilizados 30 indivíduos de Rhamdia quelen (jundiá) adquiridos na estação de piscicultura, os jundiás foram aclimatados durante três dias com temperatura em torno de 23ºC. Após a aclimatação, os peixes foram mantidos em recipientes com 20 L de água com aeração constante, com seis peixes em cada recipiente, sendo expostos as concentrações 0 (controle); 0,04; 0,08; 0,16 e 0,32 de Cu (cobre) em mg/L.

Após o período experimental os peixes foram então sacrificados por secção da medula espinhal sendo retirados os seus tecidos, fígado, cérebro e brânquias, os quais foram homogeneizados então imediatamente congelados, para posterior análise bioquímica.

O teste do efeito da toxicidade do cobre aplicado à espécie Rhamdia quelen foi realizado no laboratório de toxicologia do curso de Engenharia Ambiental da Universidade de Santa Catarina. 

3.2 Acetilcolinesterase (AChE)

A atividade de AChE cerebral foi determinada de acordo com o método de Ellman e colaboradores (1961) que consiste na taxa de produção de tiocolina. O substrato, iodeto de acetiltiocolina, é hidrolisado pela enzima, liberando tiocolina e acetato.

3.2.1 Preparação dos Tampões, Substratos e reagente de Cor

Pesou-se cerca 8,5 g de KH2PO4 e 2,5 g de NaOH e foram dissolvidas em 250 mL de água MilliQ cada concentração, para em seguida misturar 50 ml da solução de KH2PO4 com 39,50 ml da solução de NaOH, e posteriormente o pH foi ajustado com o ácido (KH2PO4).

Para determinação do substrato (Iodeto de acetilcolina) foi pesado cerca de 5,4 mg de iodeto de acetilcolina para 1mL de água MilliQ. Foi utilizado como reagente de cor o ácido 5,5’-ditiobis-(2-nitrobenzóico)(DTNB), onde são dissolvidos 39,6mg de DTNB em 10ml de tampão fosfato sendo adicionado 15 mg de bicarbonato de sódio (NaHCO3). Com 0,675mg de KH2PO4 em 50 mL de água MilliQ em pH igual a 7,00 determinou-se o tampão fosfato usado para dissolver o DTNB.

Foram utilizados para a dosagem da atividade colinesterásia em cada tubo de ensaio 1ml de tampão fosfato, 50 µL de regente de cor (DTNB) e 50 µL de substrato (iodeto de acetilcolina). Os tubos contendo 1mL de tampão fosfato e os 50 µL de reagente de cor (DTNB) foram colocados em banho termostatizado a 25ºC durante 15 min, em seguida foi adicionado em cada cubeta o conteúdo do tubo de ensaio, o volume de amostra para cada espécie e adicionado o substrato, para assim ler a sua absorbância.

Para a determinação da atividade enzimática (Ativ) foi utilizada a seguinte equação: