EXAMES DE BIOQUIMICA

EXAMES DE BIOQUÍMICA

GLICEMIA:

AMOSTRA: Soro, plasma, líquor e outros líquidos biológicos.

MÉTODO:

1. Leitura em espectrofotômetro

Comprimento de onda: 500 ± 20 nm.

Cubeta: 1cm.

Temperatura: ambiente

Medida: Contra o branco

2. Reagentes

1. Padrão - Contém Glicose 100 mg/dL.

2. Reagente de Cor - Contém tampão pH 7,5 de fosfato 70 mmol/L, fenol 5,0 mmol/L, glicoseoxidase 10000 U/L, peroxidase > 1000 U/L e 4-aminoantipirina 0,4 mmol/L.

PROCEDIMENTO MANUAL:

1- Deixar os reagentes atingirem a temperatura ambiente ou a do banho-maria antes da realização do teste.

2- Identificar 3 tubos de ensaio com "Branco", "Teste" e "Padrão" e proceder:

Tubos Branco Teste Padrão

Amostra -------------- 10L ----------------

Padrão (1) -------------- ----------------- 10 L

Reagente de cor (2) 1000 L 1000 L 1000 L

Cálculo dos Resultados

Concentração do Padrão = Cp = 100 mg/dL Concentração do Teste = Ct

Absorbância do Padrão = Ap Absorbância do Teste = At

Exemplo: Cp = 100 mg/dL Ap = 0,222 At = 0,208

FC = 450 Ct = At x FC = 0,208 x 450 = 94 mg/dL

VALORESDE REFERENCIA:

Interpretação dos resultados da glicemia de jejum

1 – Glicose entre 60 e 99 mg/dL : Normal

2 – Glicose entre 100 e 125 mg/dL: Alterada (Pré-Diabetes)

3 – Glicose ≥ 126 mg/dL: Diagnostico provisório de Diabetes Mellitus

HEMOGLOBINA GLICADA

AMOSTRA:

SANGUE TOTAL (EDTA ou heparina).

A HbA é estável por 7 dias entre 2-8 ºC. 1C

Nota - Recomendamos que a coleta, preparação, armazenamento e descarte das amostras biológicas sejam realizadas seguindo as recomendações das Boas Prática laboratórios Clínicos. Enfatizamos que os erros provenientes da amostra podem ser muito maiores do que os erros ocorridos durante o procedimento analítico.

PROCEDIMENTO DO TESTE:

Notas

1- O armazenamento prolongado das Colunas pode ocasionar um empacotamento excessivo da mesma, fato que poderá diminuir o fluxo dos líquidos em seu interior. Para evitar o problema, colocar a coluna em posição invertida por uns 10 minutos antes de usá-la. Voltar para a posição normal e esperar que haja a sedimentação da resina antes de abaixar o disco superior (etapa 2 do Preparo das Colunas).

2- A presença ocasional de bolhas na resina não afeta os resultados.

3- Os volumes de Hemolisado e de Eluente podem ser modificados proporcionalmente. Exemplos: (20 µL de Hemolisado + 4,8 mL de Eluente); (10 µL de Hemolisado + 2,4 mL de Eluente).

4- Os resultados são independentes da temperatura entre 21 e 26 ºC. Se a temperatura de trabalho for superior ou inferior, multiplicar o resultado obtido pelo fator correspondente, de acordo com a seguinte tabela:

Temperatura do Ensaio Fator de Correção

Entre 18 a 20 ºC 1,15

Entre 27 a 30 ºC 0,90

A- Preparo do Hemolisado e Eliminação da Fração Lábil.

1- Deixar os reagentes e colunas durante alguns minutos atingirem a temperatura ambiente: 21 a 26 ºC.

2- Em um tubo de ensaio, pipetar:

Tubos Teste

Sangue total (bem homogeneizado) 50 µL

Hemolisante (1) 200 µL

3- Agitar e deixar em repouso por 10 a 15 minutos na temperatura ambiente.

B- Preparo das Colunas- Ver Notas 1 e 2

1- Retirar a tampa superior das colunas e em seguida, romper a lingueta inferior da mesma.

2- Com o auxílio da extremidade plana de uma pipeta, empurrar o disco superior da coluna até atingir o nível da resina. Não comprimir a resina. Deixar gotejar o líquido contido na coluna até alcançar o nível do disco. Desprezar o eluído.

C- Cromatografia

1-Aplicar cuidadosamente sobre o disco superior da coluna:

Hemolisado 50 µL Desprezar o eluído

2- Assim que o hemolisado penetrar completamente na resina, adicionar cuidadosamente sobre a coluna:

Tampão (2) 200 µL Desprezar o eluído

3- Assim que o Tampão for eluido pela resina, adicionar cuidadosamente sobre a coluna:

Tampão (2) 2 Ml Desprezar o eluído

4- Assim que o Tampão for eluido pela resina, colocar a coluna sobre um tubo de ensaio limpo e seco. Em seguida, adicionar cuidadosamente sobre a coluna:

Eluente (3) 4 mL Recolher o eluído (Hb A1C)

D. Dosagem da Fração de Hemoglobina A1C

1- Após a eluição, homogeneizar bem o líquido contendo a fração Hemoglobina A1C. Fazer a leitura fotométrica em 415 nm, acertando o Zero 1C de absorção com água deionizada. A cor é estável por 1 hora.

A = Absorbância da Hb A do Teste 1 1C

E. Dosagem da Hemoglobina Total no Hemolisado - Ver Nota 3.

1- Homogeneizar bem o Hemolisado e pipetar em um tubo de ensaio