Eletroforese

Sumário:

Introdução........................................................................3

Materiais utilizados.............................................................4

Procedimentos....................................................................5

Resultados............................................................................6

Conclusões............................................................................7

Referências...........................................................................8

 

1.0-Introdução:

A eletroforese é uma técnica analítica utilizada na análise de macromoléculas como proteínas e ácidos nucléicos. Essa técnica foi descoberta e empregada pela primeira vez em 1937 por Arne Tisélius um bioquímico sueco. O efeito eletroforético tem como base a teoria de Debye-Hückel-Onsager, onde esta teoria de dissociação eletrolítica aceita o fato de as partículas carregadas moverem-se sob a influência de forças eletrostáticas para um eletrodo de carga oposta quando é aplicada uma diferença de potencial em uma solução contendo eletrólitos.Eletroforese em gel de agarose.Nesse caso, a agarose é utilizada como gel para a eletroforese. A agarose é um polissacarídeo, e forma uma rede que segura as moléculas durante a migração.Dependendo da concentração de agarose, têm-se uma diferença no gradiente deseparação. Para preparar um gel de agarose, simplesmente faz-se a mistura entre o pó deagarose e solução tampão (TBE). Após fundir, coloca-se brometo de etidio, que fará oDNA ou RNA "brilhar" quando exposto ao UV. Quando a mistura esfriar o gel estaráduro. Esse endurecimento é feito em um local apropriado, o mesmo local onde será feitaa corrida da amostra. Um detalhe importante é a colocação do pente no gel durante oendurecimento. O pente cria poços que serão utilizados para a colocação das amostras.A eletroforese em gel é um dos métodos mais utilizados para analisar misturas de proteínas ou outras macromoléculas. Os géis utilizados como suportes são de agarose e poliacrilamida, podem ser preparados com porosidade variável, propiciando separaçãodas moléculas segundo o seu tamanho, alem da sua carga. Proteínas menores migrammais rápido que as maiores, formando uma serie de bandas definidas, que podem ser visualizadas com por coloração especifica.Uma variante desta técnica, conhecida pela sigla SDS-PAGE, emprega um gel de poliacrilamida, em presença do detergente dodecil sulfato de sódio (SDS). O SDS liga-se a radicais hidrofóbicos das proteínas, causando sua desnaturação. Esta associação,com a maioria das proteínas, segue o mesmo padrão: uma molécula de SDS a cada doisresíduos de aminoácidos. Alem disso, cada molécula de detergente ligada atribui umacarga negativa a proteína desnaturada, mascarando a carga intrínseca da moléculanativa. O resultado, qualquer que seja a proteína, é a formação de um complexo comforma alongada, com a densidade de cargas negativas proporcional ao comprimento dacadeia polipeptídica. Este método, portanto separa proteínas segundo o seu pesomolecular. Se a proteína apresentar estrutura quaternária, suas subunidades serãodesnaturadas e dissociadas por SDS e a eletroforese determinara o peso molecular decada uma delas o emprego da eletroforese em gel, ao longo das diferentes etapas de um processo de purificação de proteínas, alem de permitir a sua separação, forneceinformações adicionais, tais como: o numero de proteínas presentes na preparação, oseu peso molecular e de quantas subunidades são formadas

 

2.0- Materiais utilizados:

Papel filtro

Placa de petri

Cubas de coloração

Pinças histológicas

Bureta

Secador

Cronômetro

Cuba de eletroforese

Fita gel agarose

2.1- Reagentes:

Solução tampão

Soro humano

Negro de amido

Ácido

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