Tecnologia de Alimentos

CENTRO DE TECNOLOGIA E DESENVOLVIMENTO REGIONAL

ALUNA: JERSICA ALEXANDRE DE ARAÚJO

MATRÍCULA: 11221148

CURSO:  MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS – NOITE

RELATÓRIO

AVALIAÇÃO MICROBIOLÓGICA DO QUEIJO MUÇARELA : CONTAGEM DO COLIFORMES TOTAIS (37° C) E FECAIS (45° C OU TERMOTOLERANTES) PELO MÉTODO NMP (TUBOS MÚLTIPLOS)

João Pessoa

INTRODUÇÃO

A técnica de Número Mais Provável (NMP) é um método quantitativo que permite determinar o NMP do microrganismo da amostra, através da inoculação de alíquota dessa amostra em vários tubos, contendo um meio de cultura líquido (caldo) adequado ao seu crescimento. A técnica do NMP é bastante versátil, permitindo a enumeração de diferentes grupos ou espécies de microrganismos, variando-se o meio de cultura e as condições de incubação. Suas principais aplicações são a contagem de coliformes totais, coliformes termotolerantes e E. coli em água e alimentos. Pode também ser utilizada em outros ensaios quantitativos, quando a contaminação esperada na amostra está abaixo do limite de detecção do plaqueamento ou quando partículas do alimento interferem na contagem em placas. Outra aplicação é a adaptação de métodos qualitativos para quantitativos, como a contagem de Salmonella, Listeria monocytogenes e outros microrganismos tradicionalmente analisados por métodos de presença/ ausência.

OBJETIVO

  Constatar se a mostra do queijo muçarela esta em conformidade com o padrão microbiológico para coliformes fecais, segundo Resolução no 12, de 02 de janeiro de 2001 da ANVISA.

MATERIAIS

•  Diluente -  Água Peptonada 0,1%;
•  Tubos de Caldo Lauril Sulfato Triptose com tubos de Durham;
•  Tubos de Caldo Verde Brilhante Bile 2% com tubos de Durham;
•  Tubos de Caldo EC com tubos de Durham;
•  Bico de Bunsen;
•  Estufa incubadora regulada a 35±0,5oC;
•  Banho-maria regulado a 45,5±0,2oC
•  Balança semi-analítica;
•  Pipetador automático regulado para 1,0 ml;
•  Ponteiras;
•  Alças.

PROCEDIMENTO

a. Preparação das diluições seriadas: Transferir assepticamente 25g de queijo muçarela para 225 ml do diluente obtendo a primeira diluição. Em seguida transferir 1 ml da primeira diluição para tubo de ensaio com 9 ml de diluente (segunda diluição). Para obter a terceira diluição, transferir 1 ml da segunda para 9 ml de diluente.

b. Inoculação: Selecionar três diluições adequadas da amostra e inocular uma série de três tubos de Caldo LST por diluição, adicionando 1 ml da diluição por tubos com 10 ml de Caldo LST.

c. Incubação: Incubar os tubos a 35 ± 0,5oC por 24 ± 2h e observar se há crescimento com produção de gás. Em caso positivo, passar ao item subseqüente. Em caso negativo, reincubar até completar 48 ± 2h e repetir a leitura, passando ao item subseqüente em caso de crescimento com produção de gás.

d. Contagem de coliformes totais: A partir dos tubos de LST positivos, transferir uma alçada bem carregada de cada cultura para tubos de Caldo Verde Brilhante Bile 2% (VB). Incubar a 35 ± 0,5oC/24±2h e observar se há crescimento com produção de gás. Em caso negativo, reincubar até completar 48±2h e repetir a leitura.

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